Informe Técnico Fontar ANR-2011-2

RECAVARREN M; QUINTANA S; MARIN M

2012-02-01/2013-12-31

Biológica

Sanidad animal-Enfermedades de virus

Introducción. Los Herpesvirus bovino tipo 1 (HVB-1) y tipo 5 (HVB-5) provocan diversasmanifestaciones clínicas en el bovino, siendo patógenos responsables de pérdidas económicas sustanciales en todo el mundo. Ambos virus pertenecen a la familia Herpesviridae, subfamilia Alfaherpesvirinae, género Varicellovirus y se encuentra estrechamente relacionados tanto genéticacomo antigénicamente. El HVB-1 está implicado principalmente en infecciones respiratorias, conjuntivitis, enfermedades genitales y abortos y puede causar encefalitis. El HVB-5 es el agenteetiológico primario de la meningoencefalitis bovina, si bien ha sido también aislado ocasionalmente a partir de los tractos respiratorio y genital y de un feto bovino abortado. Si bien, varias estrategiashan sido desarrolladas para la detección rápida de los virus, el aislamiento viral en cultivos celulares susceptibles representa el gold standard para el diagnóstico de rutina de la infección por HVB (OIETerrestrial manual, 2010), seguido de la confirmación mediante la detección del antígeno viral por o por microscopía electrónica. Sin embargo, el aislamiento viral es difícil,consume tiempo y requiere de la obtención de muestras en condiciones óptimas que contienen un número límite de partículas virales infecciosas, habiendo sido demostrado que es el menos sensiblede todos los métodos empleados. Además, el aislamiento viral y la microscopía electrónica no pueden distinguir el tipo de virus implicado dado que ambos alfaherpesvirus poseen una morfologíasimilar y producen un efecto citopático parecido en cultivos celulares. Por lo tanto, resulta fundamental la implementación de una prueba sensible y específica que pueda detectar y diferenciar estos dos virus estrechamente relacionados, tanto en el cultivo viral así como en muestras clínicas.Objetivo: Desarrollar una técnica de PCR en tiempo Real con análisis por High Resolution Melting (HRM) como método diagnóstico de HVB-1 y 5.ConclusionesSe logró realizar una correcta validación de una técnica rápida, sensible y específica para la detección del ADN de HVB-1 y 5 logrando diferenciar por HRM ambos tipos virales. Este es el primer reporte de la implementación de la HRM para la detección y diferenciación simultánea de HVB-1 y 5 la cual puede ser considerada una herramienta útil para el diagnóstico y para estudios epidemiológicos de virus patógenos del ganado.