Detección de inversiones cromosómicas mediante el uso de sondas direccionales de ADN

FARINI VERÓNICA L; SIPOWICZ PABLO; LAUDICINA ALEJANDRO; RADRIZZANI MARTIN

2004-06-25/2008-12-07

Biológica

Ciencia y cultura-Ciencia y tecnologia

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:Arial; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-bidi-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} /* List Definitions */ @list l0 {mso-list-id:1673794852; mso-list-type:hybrid; mso-list-template-ids:1450365338 201981967 201981977 201981979 201981967 201981977 201981979 201981967 201981977 201981979;} @list l0:level1 {mso-level-tab-stop:36.0pt; mso-level-number-position:left; text-indent:-18.0pt;} ol {margin-bottom:0cm;} ul {margin-bottom:0cm;} --> Es la descripción de un método para la fabricación de sondas sintéticas para la identificación de inversiones en cromosomas. Las inversiones cromosómicas cambian la orientación a los genes y pueden ocasionar una falla en la regulación de los mismos, transformación o mutación trayendo a consecuencia la muerte de la célula o una forma tumoral. Ninguna técnica citogenética  hasta hoy disponible como FISH, CGH, SKY FISH o PRINS podría detectarlas. Tampoco métodos como PCR o micro-arreglos de ADN. El desarrollo de sondas “especificas de cromátida” permitiría observar las inversiones como un salto de una cromátida a la inversa y complementaria dentro de la región de manera tal que podrán ser fácilmente detectadas, desarrollando así una herramienta nueva para el análisis citogenético. Nuestro método produce una sonda unifilar y orientada a partir de moldes de cromosomas y que son de utilidad para estudios citogenéticos para inversiones.   OBJETIVO   El objetivo principal es sintetizar sondas “cromátida-especificas” para cromosomas o genes que puedan ser utilizables para detectar inversiones peri y para céntricas con una resolución de 3 a 5 Mbp desarrollando así completamente una nueva herramienta para el análisis citogenético, con importantes posibilidades de comercialización.   OBJETIVOS ESPECÍFICOS Primero: Microdisección del centrómero cromosoma 9. Clonado de la biblioteca del centrómero del Cromosoma 9.  Optimización de protocolos de FISH en el laboratorio actual. Obtener el primer paso de la sonda bidireccional (aun no dirigida) con buena eficiencia y con los estándares de especificidad y efectividad requeridos. Microdisección del Cromosoma 9. Optimización de protocolos de FISH para todo el cromosoma 9. Clonado de la biblioteca del Cromosoma 9.  Puesta a punto de cada uno de los pasos para obtener las metafases monocatenarias. Obtención de la sonda “unifiliar” y dirigida por la microdisección. Clonar y obtener la biblioteca dirigida, que amplificada con buena eficiencia cumpla con los estándares de especificidad y efectividad requeridos.