Optimización de métodos integrados para la serología porcina detectando inmunidad contra las proteínas E/S (excretorias/secretorias) extraídas del parásito Trichinella spiralis, causante de la triquinosis.

ASENSIO CRISTIAN JORGE ALEJANDRO; ELIANA RIVA

2022-08-01

2024-01-01

Sanidad animal-Otros

Se trabajó diseñando y optimizando nuevas variantes de métodos para la serología porcina, para detectar inmunidad contra las proteínas E/S (excretorias/secretorias) extraídas del parásito Trichinella, causante de triquinosis. Las proteínas fueron analizadas mediante SDS-PAGE y western blot (WB). Se mejoró la resolución de las proteínas en geles cortos y la carga de los extractos proteicos. Se innovó con nuevos colorantes de tracking que indican visualmente donde migran las proteínas de interés, en geles enteros sin peine. Esto evitó usar marcadores de peso molecular, economizando dinero y espacio (de ancho) en los geles. A continuación, se desarrolló un nuevo método de preparación del gel stacking, sin usar peine, lo que permitió elegir la altura del gel separador y el volumen de extracto cargado. Se optimizó la electro-transferencia del WB (tiempo y buffer) a membranas atípicas, que contienen nitrocellulosa y otros ésteres de celulosa. Para detectar las proteínas totales en WB, se seleccionó un nuevo colorante rojo, poli-aniónico, más sensible que el rojo ponceau y muy útil por la poca concentración de proteínas extraídas del parásito. Como el WB es la técnica gold standard para Trichinella, pero impide analizar simultáneamente un alto número de sueros, se adaptó la técnica DOT-ELISA como un complemento, por ser más rápida y económica que el WB. Esto para ser usada como otro método en fase sólida junto al WB. Consiste en sembrar manualmente con micropipeta círculos (dots) de proteínas sobre tiras de membrana y procesar como en WB. Requirió encontrar las condiciones que reproduzcan los resultados del WB, con una solución buffer de siembra (spotting) que permita la detección sensible y lineal por los sueros, sin falsos negativos o positivos. Se optimizó la composición adecuada del buffer. Los métodos fueron parcialmente publicados en un congreso y serán ofrecidos como servicio a la Municipalidad de Tandil cuando sea otorgado en 2023 el subsidio correspondiente.