La quinasa CDK2 inhibe la progresión de horquillas de replicación en células sin actividad de CHK1

MARINA A. GONZÁLEZ BESTEIRO; NICOLÁS CALZETTA; MARÍA B. FEDERICO; VANESA GOTTIFREDI

Buenos Aires

Congreso; XX Alexander Hollaender Course Nutrition, enviroment and health; 2016

Universidad de Buenos Aires

La duplicación de nuestro material genético se ve amenazada, aún en condiciones no perturbadas por las lesiones que nuestro ADN sufre de modo constante. De no ser reparadas, esas lesiones actúan como barreras que impiden el avance de las polimerasas de ADN. Una de las proteínas que favorece la respuesta celular a dichos desafíos replicativos es Checkpoint Kinase 1 (Chk1).El modelo actual de activación de Chk1 indica que el mismo se activa en horquillas de replicación atascadas. Sin embargo, Chk1 regula la velocidad global de replicación desde el nucleoplasma, reduciendo el disparo de orígenes de replicación. Esto a su vez impacta de manera indirecta sobre la velocidad de síntesis de ADN naciente. Nuestros datos preliminares desafían ese modelo ya que sugieren que Chk1 también controlaría dicha velocidad de manera independiente de los orígenes de replicación. Se utilizaron siRNA específicos para Chk1 y se evaluó la velocidad de síntesis de ADN naciente utilizando la técnica de estiramiento de ADN. Encontramos que cuando los niveles de Chk1 son reducidos, la velocidad de elongación de ADN está impedida debido a una ineficiente activación de eventos de síntesis de ADN por translesión (TLS). Los eventos de TLS se generan cuando una polimerasa replicativa se intercambia por una especializada en la utilización de templados de ADN dañados como moldes replicativos. Nuestros datos también sugieren que en ausencia de Chk1, la elevada actividad de quinasas dependientes de ciclinas o CDKs inhibe la TLS dependiente de Polη. Por lo tanto, la actividad aumenta de CDK2 en ausencia de Chk1 altera múltiples eventos moleculares que desregulan la replicación no perturbada.