Participación del TRPV4 en la proliferación de células renales que expresan AQP2.

DI GIUSTO G; RIVAROLA V; PIZZONI A; FERNANDEZ J; FORD P; CAPURRO C

Rosario

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología 2012; 2012

Sociedad Argentina de Fisiología

Nuestros estudios previos demostraron que la presencia del canal de agua Acuaporina 2 (AQP2) aumenta la tasa de proliferación de células renales debido a una disminución de los tiempos de tránsito a través de las fases S y G2/M del ciclo celular (Rivarola et al., J Cell Physiol., 2010) Mostramos, además, que este aumento en la proliferación de las células que expresan AQP2 involucra una coordinada modulación de la activi-dad RVD (Regulatory Volume Decrease) en respuesta a los cambios en el volumen celular que ocurren normalmente durante el ciclo celular (Di Giusto et al., J Cell Biochem., 2012). Nuestra hipótesis plantea que la AQP2 formaría parte de un ?complejo funcional de sensado? requerido para la activación de las respuestas reguladoras de volumen. Como ya hemos descripto, la activación de los mecanismos rápidos de RVD en células que expresan AQP2 es dependiente de un incremento en la con-centración de calcio intracelular mediado por el canal TRPV4 (Transient Receptor Potencial Vanalloid 4) (Galizia et al., J Cell Biochem., 2012). Por lo tanto, nos planteamos como objetivo del siguiente trabajo estudiar la participación del TRPV4 en el aumento de la proliferación de células que expresan AQP2. Como modelo experimental utilizamos dos líneas celula-res de túbulo colector cortical: WT-RCCD1 que no expresa AQPs y AQP2-RCCD1 que expresa constitutivamente AQP2 en la membrana apical. En primer lugar, estudiamos la expresión del TRPV4 mediante inmunoblo-tting e inmuno'uorescencia. Luego, analizamos la proliferación celular en presencia de un bloqueante de canales TRPVs (Rojo de Rutenio, RR), y de un activador especíÿco del TRPV4 (4@PDD, 4@-forbol 12,13-dideca-noato). Los experimentos de inmunoblotting no mostraron diferencias signiÿcativas en los niveles de expresión del TRPV4, ni en homogenados ni en membranas plasmáticas, de células WT-RCCD1 y AQP2-RCCD1. Las imágenes obtenidas mediante microscopía de 'uorescencia corrobora-ron estos resultados. Cuando estudiamos la proliferación celular obser-vamos que, por un lado, el tratamiento con RR (10 XM, 48 h) no afectó el crecimiento de las células WT-RCCD1 pero redujo signiÿcativamente el número de células AQP2-RCCD1, arrestándolas en la fase G1 del ciclo celular. Por otra parte, el tratamiento con 4@PDD (0.1 XM, 24 h) aumentó signiÿcativamente la proliferación de células WT-RCCD1 hasta un nivel similar al observado para las AQP2. Estos resultados indican que, si bien ambas líneas celulares expresan el TRPV4, en presencia de AQP2 ocurre una activación diferencial del canal de calcio que podría explicar el au-mento de la proliferación observado en las células AQP2-RCCD1.