Rol de la isoforma 2 del intercambiador Na+/H+ (NHE2) en la proliferación de células renales: papel de H+ (NHE2) en la la expresión de la acuaporina 2 (AQP2).

RIVAROLA V; DI GIUSTO G; FERNANDEZ J; FORD P; CAPURRO C

Rosario

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología 2012; 2012

Sociedad Argentina de Fisiología

Previamente mostramos en células renales que la expresión del canal de agua acuaporina 2 (AQP2) induce una aceleración del ciclo celular mediada por un acortamiento del tránsito a través de las fases S y G2 del mismo (Rivarola et al, J. Cell. Physiol 2010). Esta proliferación aumenta-da en presencia de AQP2 podría deberse a que durante el pasaje por el punto de restricción, desde la fase G1 a la fase S del ciclo celular, existe una inhibición en el RVD (mecanismos de regulación que disminuyen el volumen celular) que permitiría a las células aumentar rápidamente su volumen y continuar su progresión por el ciclo celular (Di Giusto et al, J. Cell. Biochem, 2012). Esta disminución podría estar acompañada de un aumento del RVI (mecanismos de regulación que aumentan el volumen celular). Por otra parte, nuestros trabajos previos mostraron que en las células renales la NHE2 participaría en el RVI (Ford et al J. Memb. Biol. 2002). Por lo tanto el objetivo de este trabajo fue investigar si el NHE2 participaría en la proliferación celular. Para ello se utilizaron dos líneas celulares de túbulo colector cortical con características bien deÿnidas: WT-RCCD1 la cual no expresa AQPs y AQP2-RCCD1 que expresa constitu-tivamente AQP2 en la membrana apical. Se utilizaron células no sincro-nizadas (mayoritariamente en G1) o sincronizadas en la fase S del ciclo celular (con timidina). Se realizaron estudios funcionales de medición de pH intracelular (pHi) y de expresión proteica por inmunolocalización en monocapas celulares y western blot en preparaciones de membra-nas plasmáticas, citosólicas y nucleares. Los resultados muestran que, si bien existe una fracción similar de NHE2 en la membrana plasmática de ambas líneas celulares, la localización del transportador es mayoritaria-mente nuclear y perinuclear. Por otra parte la expresión total y función del NHE es mayor en las células que expresan AQP. Al inhibir la NHE2 disminuye más la proliferación de las células AQP2-RCCD1 que la de las WT-RCCD1. En la fase S del ciclo celular observamos que mientras que la actividad de intercambio del NHE2 de las células AQP2 no cambia, la de las WT está disminuida. Paralelamente observamos una disminu-ción de la expresión citosólica y nuclear de la NHE2 de las células WT. En las células que expresan AQP2 estos parámetros no cambiaron. En conjunto estos resultados sugieren que, mientras que la isoforma NHE2 permanece activa durante la fase S del ciclo celular de las células que expresan AQP2 disminuye en las células WT. Nuestra hipótesis plantea que la proliferación aumentada en presencia de AQP2 podría deberse a una actividad mayor de la respuesta reguladora de volumen RVI en estas células que favorecería un aumento más rápido de volumen y por ende una progresión más rápida hacia la fase S del ciclo celular.