Análisis de la secuencia promotora de la expresión del gen de la acrosina

VAZQUEZ-LEVIN, MH; GHIRINGHELLI, DP; RIVAROLA V; ZAHN, A; CHARREAU, EH

Buenos Aires - Argentina

Congreso; Segundo Congreso Argentino de Andrología; 1995

Sociedad Argentina de Andrología

Acrosina es una proteasa específica de espermatozoide presente en el acrosoma de todas las especies estudiadas. Estudios de inmuno-hístoquímica de testículo humano muestran la presencia de la proteína inicialmente en espermatocitos paquitene y espermátides. Utilizando el clon previamente aislado conteniendo el gen de acrosina (PGH9; Vazquez-Levin et al, 1992) se caracterizó por análisis de secuenciación un segmento de aproximadamente 2.0 kb de la región 5' no transladada del gen. Se utilizó el kit de Sequenasa (US Hio-chemical Corp., EEUU), siguiendo el protocolo sugerido por la compañía. Una vez completada la secuenciación, se realizó un análisis exhaustivo de la secuencia obtenida. En previos estudios se identificaron en la región 5' no transladada de acrosina algunas secuencias similares a las descriptas como elementos específicos reguladores de la expresión en testículo de otros genes (protamina 1 y 2, fosfogliceratqquinasa, ele; Keime et al, 1992; Vázquez-Levin et al, 1992). La secuenciación de las primeras 500 bases de la región 5' no transladada no había mostrado la presencia de secuencias promotoras TATA y CAAT. El análisis de secuencia de 2.0 kb mostró la presencia de una secuencia promotora TATA a 629 bp y 1,054 bp del codón de iniciación, y una secuencia CAAT a 742 bp. Conjuntamente, se localizaron otras secuencias relacionadas con éstas posiciones más distantes del sitio de iniciación de transcripción. Asimismo se identificó la presencia de la secuencia TGAGGTCA en posición -39- Esta secuencia se encuentra altamente conservada en otros promotores de genes específicos de testículo, y se ha encontrado en el promotor del gen de acrosina de rata y ratón. Esta secuencia es similar a la secuencia consenso del CHEM (cAMP responsive element) TGACGTCA, que se expresa en altos niveles en espermatocitos paquitene y podría regular la expresión de acrosina durante la espermatogénesis. Se localizaron dos secuencias complementarias a la secuencia ACGTCA en posiciones -332 y -521, secuencia descripla como sitio de unión de un factor de transcripción específico de testículo del promotor de la historia H2B. Finalmente, se encontró la secuencia GACTTCAGAA en posición -1288 que es idéntica en 9 de 10 posiciones a la secuencia de unión para el factor Tet-1 específico de testículo, y que aparece en el promotor del gen de acrosina de rata. Los resultados muestran la presencia de secuencias específicas en el promotor de acrosina humana altamente conservadas en rata y ratón, así como en otros genes que se expresan específicamente en testículo. Estas secuencias han mostrado estar asociadas a la regulación de la expresión genética durante la espermatogénesis y podrían controlar la expresión de acrosina humana en espermatocitos paquitene y espermátides.