Caracterización biofísica del transporte de agua y solutos en una nueva línea celular de origen renal (RCCD1)

RIVAROLA, VALERIA; CAPURRO, CLAUDIA; FARMAN, NICOLETTE; BLOT-CHABAUD, MARCEL; PARISI, MARIO

La Plata - Argentina

Congreso; XXVII Congreso de la Sociedad Argentina de Biofísica; 1998

Sociedad Argentina de Biofísica

El objetivo de este trabajo fue caracterizar la permeabilidad hídrica y su acoplamiento iónico, en una nueva línea celular derivada de túbulo colector cortical de rata (RCCD1). La medida del flujo neto de agua transepitelial (Jw, m l.cm-2.min-1) se realizó en células cultivadas sobre soporte permeable, en simultaneo con la medición de los parámetros eléctricos (VT, RT y Isc). Los resultados muestran que estas células presentan una secreción espontánea y mantenida a lo largo del tiempo en ausencia de todo tipo de gradiente (químico u osmótico) y aún en contra de un gradiente hisdrostático (Jw:-0.161 ± 0.022, n=13). El flujo secretor basal es independiente de la resistencia transepitelial (RT) y de los días de cultivo. Con el fin de evaluar los iones que estarían asociados a los movimientos de agua, se realizaron estudios farmacológicos y de sustitución iónica. El agregado de amiloride (10-5 M), bloqueante específico de los canales de sodio, indujo una reducción significativa del Jw secretor (control:-0.162 ± 0.016 vs. amiloride:-0.073 ± 0.018, p<0.01, n=15), en simultaneo con una reducción de la corriente de corto-circuito (Isc). En presencia de 5x10-3 M de DPC apical, inhibidor de canales de cloro, la secreción basal de agua aumenta significativamente [Jw control:-0.036 ± 0.002; DPC:-0.109 ± 0.027, p<0.05, n=6]. En presencia de Cl2Ba (5.10-3 M) apical, bloqueante de los canales de potasio, se observó una reducción significativa del Jw secretor (control:-0.304 ± 0.015; Cl2Ba:-0.153 ± 0.028, p<0.01, n=7] en simultaneo con una reduccción significativa de la Isc. La utilización de bumetanide basolateral, bloqueante del cotransportador 2Cl/Na/K, inhibe la secreción inicial. Actualmente se postula que el CFTR participa de la secreción de Cl- y HCO3 en los túbulos nativos. Para determinar si el mismo estaría presente en este sistema estudiamos los efectos del glybenclamide, un bloqueante específico de esta proteína. El mismo indujo una reducción significativa del Jw secretor en las células RCCD1. Los experimentos de sustitución iónica confirman los resultados farmacológicos. En base a estos hallazgos postulamos que el Jw neto consta de un "componente absortivo de agua" asociado al transporte de iones Cl- y Na+, y un "componente secretor de agua" asociado, en parte, al transporte de iones K+ y HCO-3.