Desarrollo y caracterización de nanopartículas asociadas a anticuerpos como estrategia innovadora para la detección y neutralización de la toxina Shiga tipo 2

SACERDOTI, FLAVIA (PRIMERA AUTORÍA COMPARTIDA); MORETTON, MARCELA; GOMEZ, FERNANDO DANIEL; GIRON REYES, CLAUDIO DANIEL; AMARAL, MARÍA M.; CHIAPPETTA, DIEGO; IBARRA, CRISTINA

Asunción

Congreso; XXV Congreso Latinoamericano de Microbiología-; 2021

Asociación Latinoamericana de Microbiología

Intro: Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patógeno de transmisión alimentaria responsable de desencadenar el Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). El principal factor de virulencia de STEC responsable del desarrollo del SUH, es la toxina Shiga (Stx). La variante tipo 2 de Stx (Stx2) es la que se asocia a los cuadros clínicos más graves de esta enfermedad. Objetivos: En el presente trabajo proponemos desarrollar y caracterizar nanopartículas acopladas a anticuerpos con alta capacidad neutralizante de Stx2 con el objetivo de introducir propuestas innovadoras para la detección de Stx y el tratamiento de SUH.MyM: Se formularon nanopartículas (NP) de Soluplus® al 5 y 1% (NP) en PBS y se acoplaron diferentes concentraciones (2, 4 y 6 mg/ml) de Ac bovino anti Stx2 de calostro bovino hiperinmune (NP-IgG-Stx2) o control (NP-IgG-Ctrl), previamente purificados por cromatografía de afinidad. Se evaluó por la técnica de DLS (Dispersión de Luz Dinámica) el radio hidrodinámico de las NP de Soluplus® y las IgG solas y luego de su asociación. Se evaluó la toxicidad de las NP sobre células Vero con revelado por incorporación de rojo neutro. Una vez realizado el acople de las NP con las IgG se realizaron ensayos de neutralización de Stx2 in vitro sobre células Vero con diferentes concentraciones de la NP-IgG-Stx2 o NP-IgG-Ctrl y finalmente se determinó el % de viabilidad celular para cada tratamiento. Resultados: El análisis del radio hidrodinámico de las NP de Soluplus® mostró un diámetro promedio de las 70,2 ± 1,5 nm. Las IgG-Stx2 purificadas arrojaron un diámetro promedio a la concentración máxima utilizada de 40,9 ± 2 nm. Cuando ambos componentes se asocian (NP-IgG-Stx2 o NP-IgG-Ctrl) el diámetro que se conserva es el de la nanopartícula (70,4 ± 0,2 nm). Las NP-IgG-Stx2 neutralizaron una CD50 de Stx2 sobre células Vero hasta con una concentración de 1 µg/ml de anticuerpo. Cuando se comparó la capacidad neutralizante de Stx2 por parte de IgG-Stx2 vs NP-IgG-Stx2 se observaron diferencias en la capacidad neutralizante con una mejora significativa en la viabilidad observada con el tratamiento realizado con NP-IgG-Stx2 respecto a de las IgG-Stx2 (p