INSIBIO   05451
INSTITUTO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES BIOLOGICAS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión heteróloga de enterocina CRL 35 en Escherichia coli
Autor/es:
MASÍAS RE; ACUÑA L; MORERO R; MINAHK C
Lugar:
Tafí del Valle
Reunión:
Jornada; XXVII Jornadas Científicas Asociación de Biología de Tucumán; 2010
Institución organizadora:
Asociación de Biología de Tucumán
Resumen:
Enterocina
CRL 35 es una bacteriocina producida por Enterococcus
mundtii
CRL 35. Este péptido demostró ser muy efectivo en controlar el
crecimiento de Listeria
monocytogenes,
disipando la fuerza protón motriz e induciendo la pérdida de
contenido de iones y pequeños solutos. Por otro lado, enterocina CRL
35 presentó efecto sinérgico con antibióticos, lo que abre la
posibilidad de su utilización en clínica.
Debido
a que las bacteriocinas son sintetizadas en relativamente bajas
concentraciones por las cepas productoras que deben ser además
cultivadas en medios complejos, se hace muy difícil su posterior
purificación. Por lo tanto, el objetivo del presente trabajo fue
expresar enterocina CRL35 en Escherichia
coli
para asegurar alto rendimiento
y un proceso de obtención simplificado.
En
el presente trabajo se subclonó el gen estructural de esta
enterocina, munA,
en el vector de expresión pET-22b(+) que permite insertar la
secuencia de interés corriente abajo del péptido líder de la
proteína PelB, garantizando la exportación al espacio periplásmico
mediante el mecanismo general de secreción. Para
la sobreexpresión se utilizó E.
coli
Rosetta-Gami, una cepa que cuenta con un plásmido que codifica ARNs
de transferencia para codones raros en E.
coli,
asegurando la síntesis de cualquier proteína heteróloga.
Enterocina
CRL35 fue expresada exitosamente en E.
coli,
siendo transportada al espacio periplásmico y al sobrenadante del
medio de cultivo, tanto en medio completo Luria-Bertani como en medio
mínimo M9. Se determinaron las condiciones óptimas de producción
en este último medio. Finalmente enterocina CRL35 fue purificada a
homogeneidad a partir de 1 litro de cultivo en sólo dos pasos
cromatográficos debido a la ausencia de otras proteínas
contaminantes en las condiciones seleccionadas.
Estos
resultados permitirán diseñar estrategias para la producción en
gran escala en sistemas de cultivo continuo con el fin de obtener
esta bacteriocina en el orden de los miligramos para su aplicación
en la preservación de alimentos y en estudios clínicos.