Obtención de suero anti-Rice stripe necrosis virus por expresión heteróloga de la capside proteica viral

MARCOS GIOVANI CELLI; BANGRATZ M; PINEL-GALZI A; BRIZARD JP; HÉBRARD E; BRUGIDOU C

Corrientes

Congreso; 5°Congreso Argentino de Fitopatología; 2021

Asociación Argentina de Fitopatologos

El ?entorchamiento del arroz?, causado por el Rice stripe necrosis virus (RSNV), es una gran amenaza para el cultivo del arroz en Argentina. Hasta la fecha, se desconoce su distribución, cultivares promisoriamente resistentes y no se cuenta con un suero comercial para su detección. El objetivo de este trabajo fue la obtención de suero anti-RSNV para la detección del virus en un gran número de muestras en simultaneo y de bajo costo. Se diseñaron cebadores específicos que permitió amplificar el gen de la CP y se hizo una construcción con el vector de expresión pETM-41 (EMBL). El plásmido generado fue introducido en E. coli BL21 y la inducción de la expresión se realizó con isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG). Para la purificación de la proteína se utilizó columna HisTrap FF (GE Healthcare). La producción de suero policlonal anti-CP*RSNV fue realizada en conejo por 4 inyecciones intramusculares de 375µg de la proteína purificada a intervalos de 15 días. Se realizó la sangría y la calibración para la detección de RSNV por método de ELISA indirecto (PTA-ELISA) utilizando el suero obtenido y anticuerpos anti-conejo conjugados con fosfatasa alcalina (BIORAD, dilución de uso 1:3000). Utilizando controles sanos y enfermos conservados de diferentes maneras (liofilizado, seco, congelado y fresco), se determinó que la dilución óptima del suero fue de 1:8000. Como resultado de este trabajo se dispone de suero específico en cantidad y calidad, para el diagnóstico de RSNV en plantas de arroz.