CUANTIFICACIÓN DE ASPARAGINA EN CULTIVOS CELULARES CON ELECTRODOS COMPÓSITO DE NANOTUBOS DE CARBONO MODIFICADOS CON COBRE

LÓPEZ RODRIGUEZ, MARIA LORENA; LUQUE, GUILLERMINA L.; MADRID, ROSSANA E.; FELICE, CARMELO J.; FERREYRA, NANCY F.; GIACOMELLI, CARLA E.; RIVAS, GUSTAVO A

Congreso; V Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

Algunos medios de cultivo líquidos utilizados frecuentemente en cultivos celularesutilizan asparagina (Asp) y glucosa (Glu) como fuentes de nitrógeno (N) y de carbono(C), respectivamente(1). En estudios de actividad de Streptomyces sp. M7 (SM7)realizados por impedancimetría, se encontró que la Asp se comporta como uninterferente ya que se observaron respuestas similares para cultivos en medio mínimo líquido (MM) en presencia y en ausencia de la fuente de C.El objetivo de este estudio es dilucidar si la SM7 efectivamente consume Asp tantocomo fuente de N como de C. La determinación de Asp se efectuó amperométricamente utilizando electrodos compósitos de nanotubos de carbono modificados con micropartículas de cobre. La principal ventaja que presenta este sensor es la cuantificación de aminoácidos independientemente de su electroactividad y sin necesidad de derivatización previa(2).Se realizaron cultivos de distintas concentraciones iniciales de SM7 en MM con Asp3,33 mM en presencia y ausencia de Glu a 30°C sin agitación. Las muestras se tomaron cada 24h durante 9 días, se centrifugaron y los sobrenadantes se conservaron a -18oC hasta el momento de la medición. La concentración de Glu residual se midió por método de Trinder(3). Para la cuantifiación de Asp residual se empleó amperometría con transporte convectivo controlado, aplicando 0,0V (vs. Ag/ AgCl/ NaCl 3 M) como potencial de trabajo y evaluando los cambios en corriente ante el agregado del sobrenadante. La concentración de Asp residual se determinó a partir de calibrados obtenidos mediante adiciones sucesivas de Asp 5,0 x 10-7 M, preparada en MM, encontrándose una alta estabilidad y reproducibilidad. La sensibilidad que presentó el sensor fue de (8,24 ± 2,10) x10-6 AM-1, similar a la obtenida para soluciones de Asp preparadas en “buffer” fosfato 0,050 M pH 7,40. Más del (90 ± 10) % de la Asp se consumió dentro de las 72h para todas las concentraciones bacterianas estudiadas. Sin embargo, el consumo del aminoácido en presencia de Glu es despreciable (menor al 10%) durante los 9 días. La glucosa se consumió en 7 días, en acuerdo con experimentos anteriores(4). Los resultados permiten concluir que la bacteria consume el aminoácido como fuente de N y de C. En consecuencia, para evaluar la actividad de la SM7 por impedancimetría se debería reemplazar la Asp por otra fuente de N.