Clonado del gen Snakin-2 y obtención de plantas transgénicas de Solanum tuberosum cv. Kennebec

GONZALEZ DE URRETA, MARTIN; NAHIRÑAK V; ALMASIA N I; HOPP H E; VAZQUEZ ROVERE C

Mar del Plata

Congreso; VIII Encuentro Latinoamericano y del Caribe de Biotecnología REDBIO-Argentina 2013; 2013

Snakin-2 (SN2) es un péptido perteneciente a la familia Snakin/GASA aislado y purificado a partir de tubérculos de papa. En ensayos in vitro mostró actividad antimicrobiana frente a patógenos fúngicos y bacterianos (Berrocal-Lobo y col. 2002). Posee un péptido señal de 23 aa, una región intermedia variable y un dominio C-terminal con 12 cisteínas conservadas. Con el fin de estudiar el rol y el mecanismo de acción in planta, se amplificó la secuencia codificante de sn2 a partir de ADN de S. tuberosum cv. Kennebec, y se clonó en el vector de entrada pCR®8/GW/TOPO®. Luego se recombinó en los vectores binarios de expresión pH2WG7 y pH2GW7, bajo el promotor constitutivo 35S, en orientaciones sentido y antisentido respectivamente. Mediante ensayos de transformación de S. tuberosum cv. Kennebec vía Agrobacterium tumefaciens se obtuvieron 10 líneas con la construcción en sentido y 10 en antisentido confirmadas por PCR y se analizaron los niveles de expresión de SN2 en las líneas transgénicas mediante Northern blot a partir de ARN extraído de hojas. Finalmente, se realizaron ensayos de inhibición de crecimiento microbiano en placa, utilizando extractos crudos obtenidos a partir de líneas sobreexpresantes seleccionadas y se observó una disminución en el crecimiento de Rhizoctonia solani.