Producción de reactivos serológicos para el diagnóstico de patógenos virales en especies de la familia Orchidaceae

DOTTORI, C.A.; DE BREUIL, S.; TUMA, M.A.; NOME, C.F.

Cordoba

Congreso; 40° Congreso Argentino de Horticultura; 2018

ASAHO - ISHS

La floricultura es una disciplina en continuo crecimiento tanto a nivel nacional como internacional. Actualmente, la producción y comercialización de orquídeas (familia Orchidaceae) se encuentra en auge debido a que representan un grupo de especies altamente demandadas por los mercados. La multiplicación de las orquídeas es principalmente agámica, pudiendo ser multiplicadas a gran escala mediante técnicas de micropropagación in vitro. Estas formas de reproducción asexual hacen necesario partir de material madre libre de virus de sanidad controlada. En el mundo, los virus más importantes en esta familia botánica por sus elevados valores de prevalencia son Cymbidium mosaic virus (CyMV) y Odontoglossum ringspot virus (ORSV). El objetivo de nuestro trabajo fue elaborar reactivos de diagnóstico serológicos para la detección e identificación de plantas infectadas con estos patógenos virales. Se realizó una purificación de partículas virales a partir de plantas de Nicotiana glutinosa coinfectadas con CyMV y ORSV mediante centrifugación diferencial en gradientes de cloruro de cesio. Las dos bandas formadas en el gradiente fueron evaluadas por microscopía electrónica observándose en la banda superior partículas rígidas de ca. 300 nm de longitud, correspondientes al ORSV, mientras que en la banda inferior se visualizaron partículas flexuosas de unos 480 nm de longitud, características del CyMV. Cada fracción viral purificada fue inoculada de manera intramuscular en diferentes conejos, aplicándose refuerzos a los 7 y 20 días posteriores a la primera inoculación (dpi). Se realizaron sangrías a los 15, 30 y 37 dpi y en cada ocasión se purificó la fracción sérica. La calidad de los sueros se evaluó realizando diluciones seriadas para detectar los virus mediante la técnica de ELISA en membrana de nitrocelulosa. Como resultado se obtuvo un antisuero contra CyMV (dilución 1:10000) y un antisuero para la mezcla CyMV + ORSV (dilución 1:100000). Estos reactivos de diagnóstico facilitarán la evaluación y el manejo sanitario de las plantas de orquídeas mejorando así los sistemas de producción.