Cultivos celulares primarios de células de pejerrey (Odontesthes bonariensis) para su uso como sustratos en el estudio de virus de interés ictícola?

NOGUEIRAS J; COLINA S; CASTRO N; YOROJO MORENO V; SERENA M. S.; ECHEVERRÍA M. G.; METZ G. E

La Plata

Congreso; I Congreso Virtual de Microbiología Veterinaria; 2021

FCV-UNLP

El pejerrey (Odontesthes bonariensis) es un pez de importancia económica y ecológica de la región pampeana. Se describen numerosos tipos de microorganismos que lo afectan, sin haberse documentado aun a los virus. El aislamiento viral en células susceptibles es la técnica de referencia recomendada para el estudio de virus, por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue obtener, cultivar y mantener in vitro células de O. bonariensis para utilizarlas como sustrato. Se recolectaron dos ejemplares de O. bonariensis en la laguna San Lorenzo (provincia de Buenos Aires) y se mantuvieron vivos en bolsas de plástico con agua de origen y oxígeno. En el laboratorio, los peces se sacrificaron por tracción medular de acuerdo con los estándares de bienestar animal (Guía Eutanasia AVMA 2020) y en esterilidad se procedió a la recuperación de diferentes órganos para realizar las técnicas de explanto y cultivo primario. Se tomaron muestras de piel, aleta caudal, gónada, riñón, hígado, páncreas y cerebro. Para realizar los explantos se siguieron los procedimientos estándar. Luego, con la mayor fracción posible del órgano de interés se disgregó primero mecánicamente en mortero, para luego proceder a la disgregación enzimática con tripsina. Se separaron por filtración las fracciones de órganos que no se hubieran disgregado de manera completa, se inactivó la tripsina con suero fetal bovino, y diferentes alícuotas de las células disgregadas se sembraron en placas de 24 y frascos T25. Se testearon diferentes medios de cultivo: MEM, MEM con HEPES, RPMI y Dulbecco, todos suplementados con 20% de suero fetal bovino e incubando en estufa a 23°C. Con la técnica de explantos se obtuvieron células de piel, aleta caudal, hígado y cerebro, mientras que por disgregación enzimática, células de gónada y riñón, todos los cultivos con medio MEM. Hasta el momento, se realizan pasajes con diluciones de 1/2 o 1/3 al llegar las células a confluencia y se continúa trabajando en la caracterización celular y en la cinética de crecimiento de cada uno de los cultivos obtenidos. En este trabajo se logró recuperar, desarrollar y mantener in vitro células de pejerrey para ser utilizadas en futuros trabajos en virología.