Ror1 activa la via de señalizacion de Wnt y media la supervivencia de las celulas de melanoma.

NATALIA FERNANDEZ; DANIELA LORENZO; PABLO LOPEZ BERGAMI

Mar de Plata

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Melanoma se caracteriza por la activación constitutiva de diversas vías de transducción de señales tales como MAPK y PI3K/Akt. La vía no-canónica de Wnt  (independiente de β-catenina) se encuentra activa en melanoma pero poco se sabe de los mecanismos intracelulares involucrados. El objetivo de este trabajo es ampliar nuestro conocimiento de esta vía de señalización. Para ello, se determinaron los niveles de ARN mensajero de receptores pertenecientes a las familias Fzd y Ror. Mediante ensayos de PCR en tiempo real se demostró que Fzd7 y el receptor de tirosina quinasa Ror1 se encuentran sobreexpresados en melanoma. Para estudiar la importancia de la sobreexpresión de Ror1 en melanoma se diseñaron y clonaron en el vector retroviral pRetroSuper dos short hairpin RNA (shRNA) específicos contra Ror1. La transducción de células de melanoma Lu1205 con estos retrovirus provocó una eficiente inhibición de Ror1 en ensayos de western blot. La reducción en los niveles de Ror1 se asoció a una mayor inducción de apoptosis por privación de suero (22,4% vs 13,4%) y por tratamiento con Wnts. Para identificar mediadores intracelulares de la señalización por Ror1 estudiamos la fosforilación y activación de Dvl2 (intermediario de la vía Wnt) por Wnt5a en las células Lu1205. Este experimento demostró que la activación de Dvl2 por Wnt5a se encuentra disminuída cuando las células expresan el shRNA de Ror1. Por otro lado, mediante ensayos de luciferasa con un gen reportero cuyo promotor es activado por la vía dependiente de β-catenina y utilizando Wnt3a (ligando canónico) como estímulo, observamos menores niveles de estimulación en las células que expresan el shRNA de Ror1 con respecto al control. En conjunto, estos resultados indican que la sobreexpresión de Ror1 en melanoma estaría implicada en mecanismos de resistencia a apoptosis y a una mayor actividad de las vías canónica y no-canónica de Wnt y que estos efectos estarían mediados por Dvl2.