Búsqueda de regiones en las glucoproteínas de envoltura E1 y E2 del virus de hepatitis C asociadas con la compartimentación viral en células mononucleares de sangre periférica (CMSP)

DIAZ CARRASCO, J. M.; GISMONDI MI; VALVA P; GALOPPO MC; PRECIADO MV

Villa Giardino, Córdoba

Congreso; XXX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2010

El virus de hepatitis C (HCV) establece infecciones crónicas. El hígado constituye el principal sitio de replicación viral; además, se ha demostrado el tropismo por CMSP. En un estudio previo de evolución de la región hipervariable 1 (HVR1) de E2 y compartimentación viral en CMSP en niños con infección crónica por HCV, hemos detectado variantes virales en CMSP con secuencias de HVR1 que pueden diferir de las detectadas en plasma, lo que sugiere un tropismo selectivo. Objetivo: Estudiar la presencia de residuos aminoacídicos en las glucoproteínas de envoltura E1 y E2 que sean posibles marcadores de compartimentación viral. Se analizaron 5 muestras pareadas plasma-CMSP de 4 pacientes pediátricos con infección crónica por HCV. Se separó el plasma y se aislaron las CMSP por centrifugación sobre Histopaque (Sigma). Se extrajo el ARN total y se amplificó por RT-PCR anidada un fragmento de 1866 pb que abarca el extremo 3’ codificante de la proteína de cápside y E1-E2 completas. Se secuenciaron los productos de PCR y se identificaron las posiciones polimórficas en nucleótidos y en aminoácidos. Las posiciones con residuos diferentes entre plasma y CMSP se analizaron para cada par de muestras y para cada compartimento. La proporción de posiciones variables a nivel de nucleótidos fue de 15% (270/1779) para todos los grupos de secuencias. La relación entre cambios sinónimos y no sinónimos también se mantuvo constante (47% y 53%, respectivamente). El análisis conjunto de todas las secuencias aminoacídicas mostró variabilidad en 116/593 posiciones (19,6%; 2-5 residuos por posición). Este porcentaje fue similar en ambos compartimentos (19,2% plasma y 17,9% CMSP). Al analizar las muestras pareadas, se encontraron 48 posiciones con aminoácidos distintos entre plasma y CMSP, 18 de las cuales estuvieron presentes al menos en dos pacientes. Asimismo, 14/48 se hallaron concentradas en HVR1. El resto de las diferencias entre pares plasma-CMSP se concentraron principalmente en el ectodominio de E1 (aa 221-246) y en la región N-terminal de E2 (aa 685-688). Por otro lado, el análisis de la secuencia de aminoácidos consenso para cada compartimento permitió identificar 28 posiciones con residuos específicos únicamente en plasma o CMSP. 8/28 se ubicaron en las regiones 221-246 y 685-688. En particular, en pacientes distintos se observó que 3 de estas 8 posiciones presentan un único aminoácido en CMSP y varios residuos diferentes en plasma, lo que sugeriría una selección en CMSP. Por último, las regiones de unión al receptor CD81, los sitios de glicosilación y de clivaje por proteasas celulares y los dominios transmembrana de E1 y E2 resultaron conservados en todas las secuencias. Las posiciones encontradas en las zonas 221-246 y 685-688 sientan bases para estudiar la posible relación de estas regiones, junto a HVR1, con el tropismo de HCV por CMSP. El estudio de un mayor número de muestras permitirá evaluar nuestros hallazgos.