INVESTIGADORES
CAVATORTA Ana Laura
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de un ensayo para la detección precoz del cáncer cervical.
Autor/es:
CHOUHY, DIEGO; CAVATORTA, ANA LAURA; BENITEZ GIL, LISANDRO; NOCITO, ANA LIA; CITTADINI, JORGE; GARDIOL, DANIELA; GIRI, ADRIANA A.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
El cáncer cervical es una de las neoplasias más comunes que afecta los órganos
reproductivos de la mujer. En Latinoamérica ocupa el primer lugar en incidencia, siendo en
Bs.As. de 25,4/100.000 mujeres. La prevención del cáncer cervical se basa en la realización
periódica del test de Papanicolaou (Pap) y la colposcopía. Sin embargo, se siguen
registrando casos de carcinomas cervicales en mujeres controladas periódicamente con el
Pap, sugiriendo que esta metodología presenta una limitada sensibilidad para la detección
precoz. Ha sido establecido que la infección con tipos oncogénicos de papillomavirus
humanos (HPV) es el evento clave en el desarrollo del cáncer cervical. Dada la ausencia en
nuestro país de métodos comerciales para la detección de secuencias de HPV, surge la
necesidad de desarrollos regionales. El objetivo de este trabajo es el desarrollo de un
ensayo molecular para la detección de HPV y tipificación de los 5 tipos oncogénicos de
mayor incidencia como herramienta para el diagnóstico precoz del cáncer cervical. Se
desarrolló el L1HPVPCR, un ensayo basado en PCR con revelado colorimétrico para la
detección de la mayoría de HPV mucosotrópicos y tipificación de los HPV oncogénicos de
mayor incidencia (HPV-16,-18,-31,-33,-35), utilizando los cebadores genéricos MY11 y
MY09 biotinilado. Los amplicones biotinilados son hibridizados en fase líquida a una sonda
genérica conjugada a fluoresceína, capturados a una microplaca revestida con
estreptavidina y detectados con anticuerpo anti-fluoresceína conjugado con peroxidasa y un
cromógeno. Las muestras HPV-positivas son tipificadas con sondas fluoresceinadas tipoespecíficas
para HPV-16,-18,-31,-33 y -35, con un procedimiento similar al descripto para la
sonda genérica. El L1HPVPCR resultó ser sensible (10-100 copias de HPV/reacción),
reproducible y de fácil ejecución. Para convalidar su aplicabilidad diagnóstica se analizaron
130 muestras de cepillado cervical: 94 con citología normal, 24 lesiones escamosas
intraepiteliales de bajo grado (LSIL) y 12 de alto grado (HSIL). El ADN viral fue detectado en
el 54% de los casos (70/130), de los cuales el 57% (40/70) pertenecía a HPV oncogénicos.
El 55% (52/94) de las muestras con citología normal, fueron negativas en el ensayo
molecular. Un resultado doble-negativo (citología normal y ausencia de ADN de HPV
oncogénico) indica mejor pronóstico contra futuras lesiones HSIL que tres resultados
negativos consecutivos en la citología. El 45% (42/94) restante de las muestras con
citología normal presentó secuencias de HPV, detectándose tipos oncogénicos en el 21%
(20/94) de las mismas. Mujeres con citología normal que resulten positivas al ADN de HPV
oncogénicos presentan un riesgo 100 veces mayor de desarrollar HSIL, respecto a las
mujeres negativas para ambas determinaciones. Entre las muestras que presentaron LSIL,
el 75% (18/24) fue positiva para HPV, tipificándose HPV oncogénicos en el 42% (10/24).
Todas las muestras HSIL que presentaron secuencias de HPV (83%; 10/12)
correspondieron a tipos oncogénicos. Además, el L1HPVPCR fue utilizado para demostrar
la asociación de HPV en muestras de tejidos embebidos en parafina de mucosa cervical.
Este análisis permitió correlacionar la degradación del oncosupresor DLG por la
oncoproteína E6 de HPV oncogénicos con los procesos de transformación maligna en el
trabajo publicado por nuestro grupo. Considerando la falta de ensayos moleculares
comerciales en la región para la detección y tipificación de HPV, el ensayo aquí presentado
constituye un instrumento de importancia para un seguimiento eficiente de las mujeres con
riesgo de desarrollar cáncer cervical.