Fosforilaciones de la cochaperona de Hsp90, FK506-binding protein 51

ZGAJNAR NR, DANERI-BECERRA C, GALIGNIANA MD

Congreso; LX Reunión Anual de SAIC; 2015

La inmunofilina FKBP51 es una cochaperona de Hsp90 a la que recientemente hemos descripto en mitocondria, con acción antiapoptótica y sobreexpresada en células tumorales. Los Western blots muestran varias bandas que atribuimos a isoformas fosforiladas. Con el fin de evidenciar si estas isoformas tienen especificidad de organela, realizamos fraccionamientos subcelulares e incubamos a FKBP51 con fosfatasa alcalina en condiciones moderadas. En geles resolutivos, FKBP51 muestra al menos cuatro isoformas (a, b, c y d), estando las a y b ausentes en la fracción citosólica, y siendo las b y d abundantes en el núcleo. La isoforma d (la menos fosforilada) es escasa en las mitocondrias comparada con las fracciones nucleares, siendo la isoforma c abundante en ambas. Western blots con anticuerpos anti-fosfoaminoácidos mostraron señal para P-Thr. El fraccionamiento de extractos de hígado demostró que las formas mitocondriales de FKBP51 migran al núcleo durante el ayuno, lo que podría deberse al estrés generado por ayuno prolongado. Analizamos por microscopía confocal a FKBP51 en fibroblastos L1 ayunados de suero en un medio suplementado con variadas hormonas a fin de elucidar la contribución individual de cada sistema, lo cual a su vez se asocia al estado de fosforilación de FKBP51. La privación de suero relocaliza a FKBP51 en el núcleo, lo que se previene totalmente si el medio se suplementa con 1 mM cAMP, 1 mM cGMP, 4 µM insulina ó 0,2 ng/ml glucagón. Lo hace parcialmente con 0.3 nM angiotensina II ó 15 nM ADH (ambas activan la vía de ACTH in vivo), y no lo hace con 1 µM dexametasona, 50 nM ACTH, 3 nM epinefrina ó 75 µM forskolina. El factor común de las cascadas protectoras parece ser la producción de nucleótido cíclicos, la que se sabe es sinergística en el hígado para los casos de insulina y glucagón. Concluimos que FKBP51 es una fosfoproteína ubicua cuyo grado de fosforilación condiciona su localización subcelular, siendo ello regulado por el balance hormonal.