LA INMUNOFILINA FKBP52 ESTIMULA LA ACTIVACIÓN DEL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN NFkB

ERLEJMAN AG; MOLINARI AM; MAZAIRA GI; VECCHIONE MB; GALIGNIANA MD

Mar del Plata

Congreso; LV Reunion Anual de SAIC; 2010

SAIC

El factor de transcripción NF-kB (RelA/p50) participa en la regulación de genes involucrados en la inflamación, la diferenciación y la muerte celular. Su activación es mediada por la fosforilación del inhibidor lkB mediante la quinasa IKK, y luego transloca al núcleo. Resultados previos de nuestro laboratorio demostraron que la inmunofilina (INM) de alto peso molecular FKBP51 (FK506-binding protein 51) inhibe la actividad transcripcional de NF-kB. Las INMs FKBP51 y FKBP52 participan en el retrotransporte de receptores de esteroides regulando su actividad transcripcional de forma mutuamente excluyente. El objetivo de este trabajo fue estudiar a FKBP52 como posible modulador de la actividad transcripcional de NF-kB. Utilizando proteínas purificadas, demostramos que GST-FKBP52 coinmunoprecipita con HA-RelA, sugiriendo que ambas proteínas pueden formar complejos. Luego se evaluó por ensayos de EMSA la capacidad de unión de NF-kB al DNA inducida por el éster de forbol PMA; y se observó que mientras FKBP52 incrementó tal propiedad, FKBP51 la inhibió. Se transfectaron células HEK-293T con un gen de reporte cuyo promotor responde a NF-kB, y se cuantificó la respuesta transcripcional en presencia de cantidades crecientes de FKBP52 (0,1-3 mg). FKBP52 estimuló la actividad de luciferasa de forma concentración-dependiente, incrementando hasta 8 veces la activación inducida por PMA. Este efecto fue abolido tanto en células HEK-293 que sobreexpresan de manera estable a FKBP51, como en células HEK-293 convencionales cotransfectadas con ambas INMs. Estos resultados sugieren que ambas INMs estarían actuando en forma contrapuesta. Por último, se estudió la cinética de translocación nuclear de NF-kB por IFI, observándose que FKBP52 aumenta el tiempo de permanencia de NF-kB en el núcleo. Concluimos que FKBP52 actúa estimulando la actividad transcripcional de NF-kB. Especulamos este efecto de FKBP52 podría tener lugar tanto a nivel de la translocación de NF-kB y/o en su sitio promotor