REGULACIÓN DE LA LOCALIZACIÓN SUBCELULAR Y LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DE GR POR LAS PROTEÍNAS TPR 14-3-3sigma Y PP5

MAZAIRA GI, MONTE M, ERLEJMAN AG, GALIGNIANA MD

Mar del Plata

Congreso; LV Reunion Anual de SAIC; 2010

SAIC

GR forma complejos con hsp90, hsp70, p23 y una prote¨ªna TPR. Seg¨²n la secuencia y la orientaci¨®n espacial de sus ¦Á-h¨¦lices antiparalelas de dominios de 34 aa, algunas prote¨ªnas TPR se unen a hsp90. Es as¨ª como CyP40, PP5, FKBP51 y FKBP52 se asocian a receptores esteroidales. En trabajos previos demostramos que la uni¨®n de hormona favorece el recambio de FKBP51 por FKBP52, la que a diferencia de FKBP51, favorece el retrotransporte de GR y su actividad transcripcional. Se ha reportado que 14-3-3s retiene a GR en el citoplasma e inhibe su actividad transcripcional. Estudios cristalogr¨¢ficos muestran que 3 de las 9 ¦Á-h¨¦lices de 14-3-3 superponen su geometr¨ªa con la de los dominios TPR de PP5. Aqu¨ª evaluamos la posible redundancia funcional sobre GR de ambas prote¨ªnas. La inmunoprecipitaci¨®n de GR coadsorbe a hsp90, FKBP52 y PP5, pero tambi¨¦n a 14-3-3s. En ausencia de esteroide, GFP-GR se excluye del n¨²cleo en proporci¨®n significativamente mayor (P¡Ü0,05) que en c¨¦lulas normales (31,5¡À4,2%) al sobreexpresar a 14-3-3s (20.2¡À3,1%) o al dominio TPR de PP5 (11,3¡À2,7%), siendo la velocidad de importaci¨®n de GR menor (t0,5 = 4¡¯, 8¡¯ y12¡¯ respectivamente) . En contraste, la sobreexpresi¨®n de PP5 muestra una mayor proporci¨®n de GR nuclear (50,7¡À4,6%) y mayor enlentecimiento del tr¨¢nsito (t0,5 =22¡¯). La velocidad de exportaci¨®n nuclear tambi¨¦n se enlentece, siendo los t0,5 de 13,5 h (control), 4 h (14-3-3), 3,5 h (PP5) y 2 h (TPR). Mientras que TPR inhibe la actividad transcripcional, PP5 y 14-3-3 muestran un perfil bif¨¢sico (activaci¨®n seguida de p¨¦rdida de activaci¨®n o de franca inhibici¨®n para el caso de 14-3-3). En resumen, si bien 14-3-3 y PP5 poseen dominios TPR similares y efectos transcripcionales equivalentes, sus acci¨®n sobre el transporte de GR es opuesta (14-3-3 favorece la retenci¨®n citoplasm¨¢tica y PP5 la nuclear). El dominio TPR aislado es siempre inhibitorio (transcripci¨®n y transporte) debido a su eficiencia para en competir con cualquier otro factor TPR.