“Expresión de las proteínas M y gP5 del virus de la Arteritis Viral Equina”.

METZ, G E; SERENA, MS; GAMBARO, S.E; PANEI, C.J; DIAZ, S; NOSETTO E.O; ECHEVERRÍA M. G

Huerta Grande, Córdoba

Jornada; XXX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2010

La Arteritis Viral Equina (AVE) es una enfermedad viral, endémica en Estados Unidos y Europa. La infección natural en los equinos ocurre tanto por transmisión vertical (infección de madre a hijo), como por transmisión horizontal (infección por vía respiratoria y venérea). El virus de Arteritis Equina (VAE) pertenece al orden Nidovirales, familia Arteriviridae, género Arterivirus. La característica mas relevante de la infección por el VAE es producir infecciones subclínicas. Sin embargo, de manifestarse la enfermedad, los signos clínicos más importantes son abortos, enfermedad respiratoria en animales adultos y neumonía en potrillos. En nuestro país, la vacunación estuvo prohibida por el SENASA ya que no permitía la distinción serológica entre animales naturalmente infectados de animales vacunados. Sin embargo, a raíz del brote ocurrido en el mes de abril de este año, el SENASA a través de su Resolución N° 446/2010, autorizó la importación de vacuna atenuada (ARVAC), con carácter de excepción, para uso exclusivo en padrillos de la raza sangre pura de carrera (SPC). Los ORF5 y ORF6 del genoma viral codifican para las proteínas gP5 y M respectivamente, cuya interacción es crítica para la infectividad y expresión de los determinantes antigénicos del virus. La resolución de utilizar vacunas atenuadas abre la posibilidad de reversión de la cepa atenuada como Objetivo El objetivo de este trabajo de investigación fue estudiar la capacidad inmunogénica de la proteína M del VAE y su potencial uso como inmunógeno. Materiales y Métodos Se utilizaron diferentes técnicas de biología molecular y la metodología clásica de cultivos de células de insecto para la producción y obtención de la proteína M del VAE expresada en el sistema baculoviral (pFastBacHT-B). Resultados Se obtuvo el vector recombinante pFastBacHT-B/M para transfectar células de insecto Sf9. Luego de la purificación por plaqueo se seleccionó un clon con el que se realizaron las pruebas de expresión y recuperación de la proteína M en células High Five. La proteína M purificada por columnas de afinidad, fue inoculada en ratones Balb/C por vía intraperitoneal con el uso de adyuvante de Freund. Los sueros obtenidos a los 28 días, luego de 3 inoculaciones, se analizaron mediante la técnica de Western Blot y Neutralización Viral. Conclusiones La proteína M demostró poseer capacidad inmunogénica al analizar mediante Western Blot con antígeno semipurificado los sueros de ratones inoculados. Por otro lado, la capacidad neutralizante de los sueros obtenidos mediante la técnica de Neutralización Viral evidenció ser baja pero específica.