ESTUDIO DEL MECANISMO DE ACCIÓN INHIBITORIA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE TEGUMENTO DE ARACHIS HYPOGAEA L FRENTE AL VIRUS DEL DENGUE

MOLIVA MELINA; OLIVA MARÍA DE LAS MERCEDES; SABINI MARÍA CAROLA; MENIS CANDELA FLORENCIA; REINOSO ELINA; GIORDANO WALTER; SUAREZ PERRONE AGOSTINA; SORIA ELIO ANDRÉS

Córdoba

Congreso; XXII JORNADAS CIENTIFICAS DE LA SOCIEDAD DE BIOLOGIA DE CORDOBA; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

El virus del dengue (flia. Flaviviridae) es un patógeno emergente que infecta a millones de personas cada año en todo el mundo y provoca fiebre del dengue, fiebre hemorrágica del dengue y síndrome de shock por dengue. No hay medicamentos antivirales efectivos para el tratamiento de estas afecciones. El maní (Arachis hypogaea L.) es una leguminosa que presenta numerosas propiedades medicinales tales como antioxidante, antiviral, antifúngica, antitumoral. El objetivo del presente trabajo fue dilucidar el mecanismo de acción antiviral del extracto etanólico de tegumento (EET) de Arachis hypogaea L contra el virus del dengue. Se determinó la actividad antiviral del EET (30 µg/ml) en las etapas de adsorción y penetración viral, post-adsorción y penetración viral, pre-tratamiento viral y pre-tratamiento celular por el método de reducción de placas de lisis adicionando el extracto en la etapa evaluada. Además, se determinó la capacidad antiviral mediante Real Time-PCR. Para ello, monocapas de células Vero fueron infectadas con el virus del dengue 2 (DENV2) y tratadas con el EET (10, 20 y 30 µg/ml) en la etapa post-penetración, 96 h después de la infección, se extrajo ARN intracelular total (ARN viral + ARN celular) con el reactivo TRIzol, luego se realizó la retrotranscripción a ADNc a partir del ARN y se determinó el porcentaje de inhibición viral mediante Real Time-PCR (primers DNF y D2R). El programa consistió en una etapa de desnaturalización a 95ºC, 3 min; seguida de 40 ciclos de amplificación (desnaturalización a 95ºC 5 seg, annealing-extensión a 50ºC, 1 min); la curva de disociación fue establecida por el equipo. La eficiencia de amplificación definida como [10 (-1/pendiente)]-1 se determinó mediante curvas de amplificación con diluciones seriadas al décimo de ADNc del control viral. Los resultados del estudio antiviral por la técnica de reducción de placas de lisis indicaron los siguientes porcentajes de inhibición viral: 84% en la etapa de adsorción y penetración, 100% posterior a la penetración viral, 92,5% en el pre-tratamiento viral y 95% en el pre-tratamiento celular. El EET presentó una gran capacidad antiviral en todas las etapas evaluadas. Por otra parte, las extracciones exhibieron altas concentraciones de ARN intracelular total (1,891 µg/µl en el control viral, 2,558 µg/µl en el tratamiento con 10 µg/ml, 2,208 µg/µl con 20 µg/ml y 1,177 µg/µl con 30 µg/ml) y la real time-PCR mostró una eficiencia de amplificación de 0,988. Los resultados indicaron que 10 µg/ml de EET inhibió en un 39,83% y que 20 y 30 µg/ml inhibieron en un 100% la síntesis del ARN del virus del dengue cuando se trató al virus en etapas intracelulares con el EET. Se concluye que el EET de Arachis hypogaea L ejerce acción inhibitoria contra el virus del dengue en todas las etapas del ciclo de la replicación viral y que un blanco de acción del EET es la síntesis del ARN viral.