INVESTIGADORES
RIGALLI Alfredo
congresos y reuniones científicas
Título:
Resultado preliminares de una metodología para la determinación de las isoenzimas de fosfatasa alcalina circulantes en plasma.
Autor/es:
GUGLIELMI, CECILIA; BRUN LUCAS; RIGALLI, ALFREDO
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Congreso; XXVII Reunión Anual Asociación Argentina de Osteología y Metabolismo Mineral.; 2010
Institución organizadora:
Asociación Argentina de OSteología y Metabolismo Mineral
Resumen:
p { margin-bottom: 0.21cm; }
Resultado
preliminares de una metodología para la determinación de las
isoenzimas de fosfatasa alcalina circulantes en plasma
Guglielmi
C, Brun LR, Rigalli A
Laboratorio
de Biología Ósea y Metabolismo Mineral. UNRosario
La
fosfatasa alcalina (FA) se encuentra como diferentes isoenzimas en el
plasma, siendo las más importantes las isoenzimas ósea
(FAo), hepática (FAh) e intestinal (FAi). La actividad de FAo
especialmente es una medida de la fase de formación del proceso de
remodelación ósea. Existen diferentes técnicas para su
determinación, como el ELISA en el que la simplicidad compite con su
alto costo. La medición de actividad pre y post precipitación con
lectina es menos utilizada. La búsqueda de una técnica rápida y
económica, requerimientos de un laboratorio de investigación,
motivaron este trabajo.
Los
objetivos de este trabajo fueron caracterizar las isoenzimas séricas
de FA de rata en función de la sensibilidad de su actividad a la
temperatura (T), el pH y la concentración de fenilalanina (Phe),
plantear un modelo matemático y desarrollar una metodología para
medir las actividades individuales de las isoenzimas en una mezcla.
Para ello se aislaron FAo, FAh y FAi a partir de sus respectivos
órganos en ratas Sprague-Dawley. En cada caso se obtuvo la enzima
con los siguientes factores de purificación: FAo
21, FAh 68, FAi 95. Se planteó un modelo que tiene como base un
sistema
de ecuaciones algebraicas lineales, donde las actividades de FAo,
FAh y FAi en
plasma son las incógnitas, la actividad total de FA constituye los
términos independientes; y los coeficientes son los porcentajes de
actividad de cada isoenzima a un dado valor de T, pH y Phe.
Se
determinó la actividad de cada isoenzima a pH= 8, T= 37ºC, Phe=
0mM y variando en el medio de incubación: a) pH de 6 a 10; b) T de
10 a 45 ºC; c) Phe de 0 a 16 mM. En cada caso se mantuvieron
valores constantes de las otras dos variables. Se
asignó el valor 100% a la actividad a pH= 8, T=37ºC y Phe=0mM y se
calculó el % de actividad para los rangos de pH, T, Phe analizado.
Se seleccionó un valor de cada variable investigada donde los % de
actividad de cada isoenzima conduzca a una solución única del
sistema de ecuaciones. .: T*=
25 ºC, pH*=9 u Phe* 8 mM
En
una mezcla de las tres isoenzimas a un dado valor de la variable
fisicoquímica, la actividad total de la FA (Act) será la suma
algebraica de las actividades de cada isoenzima multiplicada por su
porcentaje de actividad, pudiéndose escribir:
La
solución de este sistema son los valores de actividad de FAo, FAi y
FAh en plasma.
Se
realizó la medición de la actividad de cada isoenzima en una mezcla
artificial de las tres isoenzimas purificadas (90% FAi, 5% FAo, 5%
FAh) utilizando la metodología descripta. Los valores de actividad
total de FA l (expresados en pNFF pmol/L.seg) en las diferentes
situaciones fueron: T*= 25 ºC: 2.14; pH*=9: 9.93; Phe* 8 mM: 3.25.
Se aplicó la metodología desarrollada para obtener la actividad de
las isoenzima de la mezcla obteniéndose: FAi: 3.15 pNFF pmol/L.seg
(68.12%); FAo: 0.75 (16.18%) y FAh: 0.73 (15.70%).
Si
bien son resultados preliminares la metodología planteada ha dado
valores aceptables. Las ventajas de esta metodología son bajo costo,
rapidez, permite distinguir las tres isoenzimas, pudiendo ser
ampliado a la medición de otras isoenzimas como la placentaria y
renal, con el solo agregado de una nueva variable. Se están llevando
a cabo mediciones en plasma en modelos animales con valores
modificados de cada isoenzima para perfeccionar la metodología.