Caracterización de Proteínas Nóveles del Espermatozoide mediante Herramientas Bioinformáticas y Ensayos con Anticuerpos

VERÓN, GUSTAVO LUIS; DUEK, PAULA; RAFFO, FERNANDA; LANE, LYDIE; VAZQUEZ-LEVIN, MÓNICA HEBE

CABA

Congreso; VIII Congreso Argentino de Andrología SAA 2019; 2019

Sociedad Argentina de Andrología

Introducción: La infertilidad afecta al 20% de las parejas en edad reproductiva, siendo asociada en muchos casos a factores masculinos idiopáticos.Objetivos: Identificar nuevas proteínas espermáticas humanas usando herramientas bioinformáticas, caracterizar su expresión y evaluar su rol en eventos de la fecundación.Metodología: Se usó la base de datos HPA (Human Protein Atlas) para seleccionar proteínas enriquecidas en testículo/epidídimo/próstata, aplicando algoritmos con restricciones estructurales/funcionales. Se caracterizó su presencia y localización mediante Western Immunobloting (WIB) e inmunocitoquímica. Para evaluar su(s) función(es) se estudió el impacto de anticuerpos sobre la cinemática espermática (CASA; Computer-Assisted Sperm Analysis) y la interacción espermatozoide-ovocito (ensayos de penetración del cumulus, CPA; de hemizona, HZA; de hámster, SPA). Su expresión fue analizada en la base GEO (Gene Expression Omnibus) de pacientes infértiles.Resultados: Empleando bioinformática se identificaron 8 candidatos potencialmente asociados a motilidad (SM1-2), reacción acrosomal (AR1-2) o interacción espermatozoide-ovocito (SOI1-4). Su presencia fue determinada mediante WIB empleando anticuerpos de origen comercial. En particular, SOI3 fue localizada en la región acrosomal, segmento ecuatorial y cola de espermatozoides intactos y reaccionados (co-localización con PSA-FITC). La pre-incubación de espermatozoides con anticuerpos anti-SOI3 no alteró el porcentaje de espermatozoides mótiles (totales y progresivos) evaluados subjetivamente, pero condujo a una disminución de las velocidades rectilínea, curvilínea y promedio determinadas por CASA. Por su parte, la co-incubación de gametas con anticuerpos anti-SOI3 inhibió la CPA, HZA y SPA. Finalmente, se encontraron niveles alterados del transcripto de SOI3 en espermatozoides de pacientes teratozoospérmicos.Conclusión: Empleando abordajes bioinformáticos se identificaron proteínas espermáticas nóveles, cuya expresión fue confirmada. Específicamente para SOI3, su inmunolocalización en espermatozoides intactos y reaccionados, el bloqueo de su(s) función(es) por anticuerpos y los cambios de expresión de su transcripto en pacientes andrológicos permiten proponer su rol en la fecundación y su evaluación para contribuir al futuro diagnóstico y tratamiento de la infertilidad.