Análisis de los alcoholes grasos de la cutícula de Triatoma infestans en función del sexo. Expresión diferencial de los genes responsables de su síntesis.

ANDREA B. DULBECCO; JUAN R. GIROTTI; NATALÍN J. VALEFF; GUSTAVO M. CALDERÓN FERNÁNDEZ; M. PATRICIA JUÁREZ

Posadas

Congreso; IX CONGRESO ARGENTINO DE ENTOMOLOGIA; 2015

Sociedad Argentina de Entomología

Triatoma infestans (Hemiptera, Reduviidae) es uno de los principales insectos vectores del parásito Trypanosoma cruzi, agente causal de laenfermedad de Chagas.La superficie cuticular de T. infestans está cubierta por una mezcla compleja de lípidos de cadenas muy largas, donde predominanhidrocarburos y alcoholes grasos. Estos compuestos tienen un rol fundamental en la supervivencia, fisiología y comportamiento de losinsectos, evitando la pérdida de agua y la muerte por desecación, regulando la penetración de agentes químicos y biológicos y participandoen la comunicación química como feromonas de contacto involucradas en el reconocimiento sexual y la agregación entre individuos.Las feromonas sexuales son esenciales en la eficiencia reproductiva de muchas especies. Estudios previos realizados en el laboratoriodemostraron que ciertos alcoholes grasos presentes en la cutícula de hembras vírgenes de T. infestans eran esenciales para despertar losintentos de cópula por parte de los machos. Los alcoholes grasos se forman a partir de ácidos grasos de la misma longitud de cadena poracción de reductasas (FAR).En el presente trabajo, se estudiaron alcoholes grasos de la cutícula, con el objetivo de hacer un análisis comparativo de su composición ycantidades relativas en hembras y machos vírgenes de T. infestans. Asimismo, se estudió la expresión diferencial de genes codificantes deFAR del integumento en función del sexo.Los lípidos cuticulares de hembras y machos vírgenes, de edad y estado de alimentación controlados, se obtuvieron mediante extracción consolvente. Se ensayaron distintas estrategias de separación y fraccionamiento de lípidos para obtener los alcoholes grasos. Se derivatizaron asus correspondientes anhídridos mediante acetilación con anhídrido acético/piridina y analizaron mediante cromatografía gaseosa capilar(CGC) acoplada a espectrometría de masa (MS), empleando nonadecanol como estándar interno para su cuantificación.Se obtuvo RNA total a partir del integumento de machos y hembras vírgenes y se sintetizó cDNA mediante RT-PCR. Empleando primersespecíficos diseñados a partir de secuencias parciales de FAR de T. infestans disponibles en nuestro laboratorio se analizó la expresióndiferencial de los genes mediante PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR).El análisis de los alcoholes evidenció diferencias en las cantidades relativas de los alcoholes de cadenas cortas (C16-22). Las hembrascontienen entre 15 y 50 veces más eicosanol, y entre 7 y 30 veces más docosanol con respecto a los machos, dependiendo de su edad yestado de alimentación. No se obtuvieron diferencias significativas en las cantidades relativas de los alcoholes de cadenas más largas (C24-34). Los componentes mayoritarios de la fracción de alcoholes son el octacosanol, el triacontanol y el dotriacontanol, representando más del80% del total; los alcoholes de cadenas de menor longitud son compuestos minoritarios.El análisis de la expresión génica mediante RT-qPCR mostró una expresión significativamente mayor de algunas FAR en las hembrasrespecto a los machos (~2 veces).