La Ouabaína protege a las células endoteliales y epiteliales renales humanas del daño causado por la toxina Shiga tipo 2 y la citotoxina Subtilasa, sin alterar la funcionalidad de la bomba Na+/K+ ATPasa.

GIRARD MAGALÍ CELESTE; ALVAREZ ROMINA; CRISTINA IBARRA; AMARAL MARÍA M

Mar del Plata

Congreso; LIX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica LXII REUNIÓN ANUAL Sociedad Argentina de Inmunología; 2014

SAIC-SAI

La toxina Shiga tipo 2 (Stx2) causa apoptosis del endotelio y epitelio renal en pacientes con Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). Además, la Subtilasa (SubAB) también induce apoptosis de células endoteliales glomerulares humanas (HGEC), pudiendo contribuir al desarrollo del SUH. Previamente, demostramos que el pre-tratamiento con Ouabaína (OUA) 20 nM disminuye la apoptosis de Stx2 sobre HGEC y sobre la línea de epitelio renal humano (HK-2). También protege a HGEC de la apoptosis por SubAB. Los objetivos fueron: 1) Analizar la funcionalidad de la bomba Na+/K+ ATPasa en presencia de OUA 20 nM. Monocapas de HGEC o HK-2 se crecieron en un soporte permeable montado en una cámara de Ussing modificada. Se midió la corriente de corto-circuito (Isc) antes y después de la incorporación de 20 nM y 3 mM de OUA. 2) Estudiar el efecto de la OUA 20 nM sobre la proliferación celular en HGEC y HK-2. Se realizó el recuento celular en cámara de Neubauer con Azul Tripán y se estudió el ciclo celular con Ioduro de Propidio y por citometría de flujo. 3) Evaluar si el pre-tratamiento con OUA protege a las HK-2 de la citotoxicidad de SubAB. HK-2 se pre-trataron con OUA (5-30 nM) por 24 hs y luego se incubaron con SubAB (200 ng/ml) por 48 hs y en presencia de OUA. La viabilidad se determinó por incorporación de rojo neutro. La OUA 20 nM no alteró la Isc en HGEC ni en HK-2, mientras que la concentración 3 mM la disminuyó significativamente (p< 0,05, n=3). Además, el recuento celular fue mayor (48%, p< 0,05, n=3) cuando las HK-2 se trataron con OUA 20 nM. Este resultado correlaciona con un incremento (20%) de las células proliferantes (población G2/M) OUA: vs Ctrl, n=2. Por otra parte, OUA (10 nM) protegió a las HK-2 de la citotoxicidad de SubAB (OUA + SubAB: 103,0 ± 3,2 % vs 70,2  2,1 %; n=3, p