EFECTOS DE LA TOXINA SUBTILASA, SECRETADA POR CEPAS DE STEC, EN CULTIVOS PRIMARIOS DE CÉLULAS EPITELIALES DE CORTEZA RENAL HUMANA

VELAZQUEZ N; MIRARCHI F; AMARAL MARÍA M; IBARRA CRISTINA; SILBERSTEIN CLAUDIA

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica - Reunión Sociedad Argentina de Fisiología 2011- II Congreso Nacional AACYTAL - IV Reunión Científica Regional por el Bienestar del Animal del Laboratorio y el Progreso de la Ciencia; 2011

SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACION CLINICA. SOCIEDAD ARGENTINA DE FISIOLOGIA.

Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC) causa diarrea, colitis hemorrágica y Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). La toxina Subtilasa (SubAB), recientemente aislada de cepas de STEC, también es capaz de desarrollar SUH en modelos experimentales, aunque se desconoce su papel en el desarrollo de la enfermedad en humanos. El objetivo del trabajo fue estudiar los efectos citotóxicos de SubAB en cultivos primarios de células epiteliales de corteza renal humana (CERH) y comparar sus efectos con aquellos producidos por la toxina Shiga 2 (Stx2). Para ello, se desarrollaron cultivos de CERH a partir de nefrectomías de pacientes pediátricos, que fueron incubados a distintos tiempos y diluciones con SubAB y Stx2. Se midió la viabilidad celular por incorporación de rojo neutro y la apoptosis celular por coloración con naranja de acridina-bromuro de etidio. La SubAB produjo inhibición de la viabilidad celular de CERH de manera dosis y tiempo dependiente. Luego de 72 hs de incubación, la DC50 para SubAB (5 ng/ml) fue 100 veces mayor que para Stx2 (0,05 ng/ml). En cambio, a diluciones mayores no se observaron diferencias significativas entre los efectos de ambas toxinas. Luego de 24 hs, SubAB (400 ng/ml) y Stx2 (100 ng/ml) estimularon la apoptosis de CERH a un 21% y 28% respectivamente mientras que redujeron la viabilidad celular a 88 ± 7% y 75 ± 3% respectivamente. La co-incubación de CERH con SubAB y Stx2 produjo niveles de apoptosis similares a los de cada toxina por separado, pero estimuló la necrosis celular. Cuando CERH fueron incubadas con una mutante de la SubAB en el sitio activo de la subunidad A (SubA272B), la viabilidad y apoptosis fue similar al control sin tratamiento. En conclusión, la toxina SubAB tiene un efecto citotóxico directo a nivel de las células epiteliales de los túbulos de riñón humano, pudiendo contribuir de esta manera junto a la Stx2 a la insuficiencia renal característica del SUH.