INVESTIGADORES
LOUREIRO Maria Eugenia
congresos y reuniones científicas
Título:
Nucleoproteína de arenavirus: punto de partida para la búsqueda de herramientas de diagnóstico temprano de la Fiebre Hemorrágica Argentina
Autor/es:
LOUREIRO ME; ALZOGARAY V; IBAÑEZ LI; ESPERANTE S; D'ANTUONO A; ARMELLA A; GOLDBAUM F; LÓPEZ N
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología CAM 2019; 2019
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
La Fiebre hemorrágica Argentina (FHA) es una severa enfermedad endemoepidémica de la región central del país causada por la infección con el arenavirus Junín (JUNV), cuya tasa de mortalidad es del 15-30%. El único tratamiento disponible es la administración de plasma inmune de paciente convaleciente, que puede reducir la mortalidad al 1% únicamente si es aplicado dentro de la primera semana de iniciados los síntomas. En consecuencia, el diagnóstico temprano de la infección es crucial para la toma de decisión respecto a la administración del tratamiento. Si bien actualmente se emplea un ensayo de RT-PCR, no existen otros tests para el diagnóstico temprano de la FHA de fácil implementación a campo. Dado este contexto, iniciamos el desarrollo de nuevas herramientas biotecnológicas aplicables al diagnóstico precoz y/o tratamiento de infecciones por arenavirus, con particular interés en la FHA. El objetivo del trabajo fue la generación de Nanoanticuerpos que reconozcan epitopes en la Nucleoproteína (NP), proteína viral que cumple un rol fundamental en los procesos de replicación, transcripción y morfogénesis, y que se destaca por su alta inmunogenicidad. Los Nanoanticuerpos, también conocidos como Nanobodies (Nbs), corresponden al sitio de unión al antigeno presente en la cadena pesada de los anticuerpos de camélidos (VHH). Se caracterizan por ser fragmentos de pequeño tamaño (~15 kDa), altamente solubles, resistentes al calor, muy estables, y pueden ser facilmente producidos en sistemas bacterianos. Para el desarrollo de Nbs anti-NP, en primer lugar se procedió a la expresión de NP de los arenavirus JUNV y Tacaribe (TCRV) (y/o sus dominios amino o carboxilo) mediante baculovirus recombinantes o en sistemas bacterianos, como proteína de fusion a distintas etiquetas (6His o Proteina de Unión a Maltosa (MBP)), y posteriormente purificada por técnicas cromatográficas. Las diversas variantes de NP recombinante fueron alternativamente aplicadas tanto en 1) la inmunización de llamas para la construcción de una biblioteca de expresión de Nbs en fagos, 2) en el enriquecimiento de poblaciones de fagos que reconocen NP de JUNV por la técnica de biopanning y 3) en la posterior selección de clones únicos de Nbs que reconocen epitopes compartidos en NP de JUNV y TCRV. Aquellos Nbs de mayor afinidad por NP fueron seleccionados para su caracterización y serán empleados en el desarrollo de un kit de ELISA de bajo costo para el diagnóstico temprano de FHA. Asimismo, aquellos Nbs que conserven su interacción con NP de ambos arenavirus, serán también empleados para la identificación de posibles blancos candidatos de terapias antivirales, por bloqueo de interacciones proteína-proteína esenciales para el crecimiento viral.