Expresión de citoquinas en hembras bovinas lecheras preñadas infectadas naturalmente con Neospora caninum

RAMBEAUD, M.; MORÉ, G.; CAMPERO, L.M.; DELLARUPE, A.; VENTURINI, M.C.

Jornada; I Simposio Internacional y X Jornadas y Reunión Anual de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2017

La neosprosis bovina es una de las principales causas de aborto en rodeos de Argentina y del mundo. Si bien la enfermedad es causante de importantes pérdidas reproductivas, productivas y económicas, hasta el presente no existe tratamiento o inmunógeno capaz de prevenir la infección por Neospora caninum. El objetivo de este trabajo fue evaluar el perfil de citoquinas en hembras bovinas preñadas infectadas naturalmente por N. caninum. Se conformaron 8 bloques de hembras bovinas preñadas (1 animal seropositivo y 1 animal seronegativo por bloque) agrupadas según su edad gestacional. Se obtuvieron muestras de sangre mediante punción de vena yugular para aislamiento de células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de todos los animales en el 5º y 9º mes de gestación. Las CMSP fueron estimuladas in vitro con PBS (control negativo), Concanavalina A (ConA, 5 ug/ml; control positivo), y lisado de taquizoítos de N. caninum cepa NC-1 (5ug/ml) para análisis de la expresión de citoquinas por real time PCR (qPCR).De las CMSP estimuladas, se extrajo ARN total con un kit comercial. El ARN fue tratado con DNAsa durante la purificación, cuantificado mediante un fluorómetro y se evalualó su integridad por visualización de bandas 18S y 28S en gel de agarosa. El ARN (0,5 ug) se transcribió a cDNA mediante un kit comercial, y se determinó la presencia de las citoquinas IL-4, IL-10, IL-2, IL-12 e interferón gamma (INFg) mediante la técnica de qPCR utilizando primers específicos reportados previamente y un master mix comercial. La reacción de qPCR se llevó a cabo en un termociclador de tiempo real, bajo condiciones estándar.Se analizaron los datos obtenidos de animales en el 5º y 9º mes de gestación con el programa REST(http://www.gene-quantification.de/rest.html). En el 5º mes de gestación se observó un aumento en la expresión de IL-2, IL-4 e INFg tanto en los animales seropositivos como seronegativos al estimular las células con ConA. No se observaron cambios en la expresión de citoquinas luego de la estimulación con lisado de taquizoítos en animales seronegativos; sin embargo, los animales seropositivos evidenciaron un aumento en la expresión de IL-4 e INFg. En el 9º mes de gestación el patrón de expresión de citoquinas en las células estimuladas con ConA fue similar al encontrado en el 5º mes de gestación. Al ser estimulados con lisado de taquizoítos de N. caninum, los animales seropositivos mostraron un aumento en la expresión de IL-4. Al comparar la respuesta inmune entre el 5º y 9º mes de gestación, se observó una disminución en la expresión de IL-10 e IL-12 en células estimuladas con ConA, y una disminución en la expresión de IL-4 e IL-2 en células estimuladas con lisado de taquizoítos, lo cual podría estar relacionado con el estado de inmunosupresión inherente al último estadío de la gestación. La determinación de la evolución del perfil de citoquinas en diferentes etapas de la preñez puede contribuir para aclarar la eficacia de las vías de transmisión y la importancia de la reactivación de la infección durante la preñez dado el complejo mecanismo inmune/endócrino que se produce en este período, lo que permitiría diseñar estrategias efectivas de control de la enfermedad.