INVESTIGADORES
LOTO Flavia Del Valle
congresos y reuniones científicas
Título:
Purificación y caracterización parcial de una lipasa producida por Brevibacillus agri MIR-E12
Autor/es:
CARLOS NIETO PEÑALVER; FLAVIA LOTO; CINTIA ROMERO; GUILLERMO CASTRO; MARIO BAIGORI
Lugar:
Tafi del Valle, Tucumán
Reunión:
Congreso; XXVI jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán.. 2009; 2009
Institución organizadora:
Asociación de Biología de Tucumán
Resumen:
Las lipasas de origen microbiológico poseen un gran potencial en el
desarrollo de aplicaciones comerciales debido a su estabilidad,
selectividad y amplia especificidad de sustratos. El objetivo de este
trabajo es la caracterización de una lipasa producida por Brevibacillus
agri MIR-E12, aislada de una muestra de suelo. La cepa fue cultivada
aeróbicamente en medio LB a 37ºC durante 24 hs. El cultivo fue
centrifugado y la enzima fue purificada a partir del sobrenadante libre
de células. Luego de una precipitación con sulfato de amonio, y una
segunda precipitación con acetona a -20ºC por 24-48 hs., las muestras
fueron fraccionadas por cromatografía de intercambio aniónico. La
purificación se determinó en geles de SDS-PAGE teñidos con nitrato de
plata. La actividad lipasa se determinó espectrofotométricamente
utilizando como sustrato p-nitrofenil palmitato a diferentes pH y
temperaturas. Se estudió el efecto de diferentes cationes y solventes
sobre la actividad enzimática. Los resultados encontrados muestran que
B. agri MIR-E12 produjo, en la condición de cultivo ensayada, una lipasa
de aproximadamente 20 kDa, con una temperatura óptima de 40ºC y un pH
óptimo de 9. La enzima no fue termoestable; sin embargo, el agregado de
Ca2+ aumentó significativamente su resistencia térmica. El agregado del
solvente dimetil sulfóxido incrementó la actividad enzimática. La
presencia de detergentes como el Tween 80, Tween 20, SDS y Triton X100
inhibió aproximadamente un 80% la actividad, a diferencia del
deoxicolato, el 2-propanol y el glicerol que solo la afectaron
ligeramente. Dentro de los cationes, es de destacar el incremento
producido por el agregado de Ca2+, el que se encontró relacionado con la
marcada disminución por el quelante EDTA. Los resultados encontrados
muestran que B. agri MIR-E12 produce una lipasa con importantes
características biotecnológicas.