GDH3: Un gen homólogo a GDH1 implicado en la asimilación de amonio y biosíntesis de glutamato en Saccharomyces cerevisiae

AVENDAÑO, A.; DELUNA, A.; RIEGO, L.; GONZALEZ, A.

San Miguel de Allende, Guanajuato. México

Congreso; II Congreso Nacional de Biología Molecular y Celular de Hongos; 1997

Sociedad Mexicana de Bioquímica

La asimilación de amonio y biosíntesis de glutamato en Saccharomyces cerevisiae se lleva a cabo a través de dos vías: una catalizada por Ia enzima glutamato deshidrogenasa NADP+ dependiente (NADP-GDH) y otra que consiste en un ciclo constituído por Ias enzimas glutamino sintetasa (GS) y glutamato sintasa (GOGAT). En nuestro laboratorio se construyeron mutantes estructurales en los genes GDHl y GLTl, que codifican para la NADP-GDH y Ia GOGAT respectivamente, esperando obtener así un auxótrofo de glutamato. Sin embargo. la doble mutante (gdhl-, g/tl-) es capaz de crecer con un tiempo de duplicación tres veces mayor que la cepa silvestre en amonio como única fuente de nitrógeno. EI hecho de que esta doble mutante presenta una actividad residual de NADPGDH nos llevó a suponer la existencia de otra enzima capaz de llevar a cabo la misma reacción que la catalizada por el producto del gen GDH1. Al realizar una comparaci6n de la secuencia nucleotídica de GDH 1 con e1 genoma completo de S. cerevisiae se encontró un marco de lectura abierto homólogo en un 76%, localizado en el brazo izquierdo del cromosoma I previamente denominado GDH3. A partir de Ia secuencia reportada en el banco de datos se diseñaron los oligonucleótidos necesarios para Ia posterior interrupción génica de GDH3 en la doble mutante,10 cual resultó en Ia obtención del primer auxótrofo de glutamato en S. cerevisiae generado apartir de mutaciones en genes estructurales. La purificaci6n a homogeneidad del producto de GDH 3 permitirá realizar su caracterización cinética y compararlo con la NADP-GDH. Así mismo, mediante el estudio de las distintas mutantes obtenidas en el presente trabajo se podría conocer Ia función y regulación génica de cada enzima bajo diversas condiciones fisioIógicas.