Activación persistente de la vía de señalización PI3k/AKTt/mtor en papilomas cutáneos caninos.

SANZ RESSEL BL, BARBEITO CG, MASSONE AR.

La Plata

Congreso; IX REUNIÓN ARGENTINA DE PATOLOGÍA VETERINARIA Facultad de Ciencias Veterinarias Universidad Nacional de La Plata, 8-10 de Agosto de 2018.; 2018

SOEME

Los papilomas cutáneos (PC) son lesiones proliferativasepidérmicas comunes en los caninos, asociadas con lainfección por el virus del papiloma canino. Aunque lamayoría de los PC tienen un comportamiento benigno ysufren regresión espontánea, las lesiones múltiples o lafalta de regresión pueden causar problemas graves enalgunos pacientes. Entre las moléculas cuya actividadestá desregulada durante el proceso de carcinogénesis,diferentes modelos murinos han demostrado quela activación persistente de la vía de señalizaciónfosfatidilinositol3-quinasa/Akt/objetivo de la rapamicina enmamíferos (PI3K/Akt/mTOR) tiene un papel central en eldesarrollo y progresión de los PC. En el presente estudio seevaluó el patrón de expresión por inmunohistoquímica (IHQ)de diferentes moléculas implicadas en la vía de señalizaciónPI3K/Akt/mTOR en secciones de una micromatriz de tejidos(MMT) construida a partir de 41 muestras de PC caninos.Para ello, se recuperaron los bloques de tejidos fijadosen formalina e incluidos en parafina correspondientes aPC caninos de los archivos del Laboratorio de PatologíaEspecial Veterinaria, FCV, UNLP (periodo 2006-2014). Sobrecada una de las secciones coloreadas con hematoxilina yeosina (H-E), correspondiente a cada muestra, se realizó lamarcación de las áreas de tejido de interés para la posteriorconstrucción de la MMT utilizando un marcador indeleblebajo observación microscópica. El método utilizado en laconstrucción de la MMT fue el descripto por Hewitt (2004),utilizando un arrayer de tejido semiautomático (TM ArrayerTM, Pathology Devices, Inc.) y un diámetro de núcleo de 1mm. Una vez finalizada la MMT, se obtuvieron secciones de 5μm que fueron coloreadas con H-E y, posteriormente, nuevassecciones de 5 μm para IHC. La IHC se realizó utilizandoanticuerpos primarios contra pEGFRTyr1068 (EGFR fosforiladoen Tyr1068; Biocare Medical), pAktSer473 (Akt fosforiladoen Ser473; Cell Signaling Technologies), pS6Ser235/236 (S6fosforilado en Ser235/236; Cell Signaling Technologies), Ki-67 (Ki-67; Dako), y PTEN (PTEN; Biocare Medical). Para elrevelado se utilizaron anticuerpos secundarios biotinilados yel complejo de avidina-biotina o fosfatasa alcalina, utilizandocomo cromógenos 3,3?-diaminobenzidina/Deep Space Blacko Warp Red, respectivamente. Todas las secciones seescanearon a 400x usando el Aperio CS ScanScope (LeicaBiosystems Imaging Inc.) y se cuantificaron usando losalgoritmos de análisis de imágenes disponibles en el softwareImageScope (Leica Biosystems Imaging Inc.). La evaluaciónhistológica mostró una buena calidad de las secciones de laMMT, solo 5/41 (12,19%) de los núcleos de PC debieron serexcluidos análisis posteriores debido a su daño o pérdidadurante el procesamiento. La evaluación IHQ reveló unelevado número de células epidérmicas positivas paratodas las proteínas de la vía PI3K/Akt/mTOR analizadas,excepto para PTEN. La inmunomarcación de pEGFRTyr1068mostró una tinción de la membrana y, ocasionalmente,citoplasmática limitada a las células de los estratos basal yespinoso en 26/36 (72,22%) de los PC. pAktSer473 se expresóen el citoplasma y en el núcleo de las células del estratobasal y espinoso en 36/36 (100%) de los PC, mientras quese observó un patrón citoplasmático limitado a las célulasdel estrato granuloso en los PC restantes (4/36; 11,11%).En la doble inmunomarcación Ki-67/pS6Ser235/236, pS6Ser235/236se expresó en 36/36 (100%) de los PC restringiéndose nosolo al citoplasma de las células del estrato espinoso ygranuloso, sino que también de las células del estrato basaly parabasal. De hecho, muchas de las células basales yparabasales que expresaban pS6Ser235/236 coexpresaron Ki-67. Además, se observó que todos los PC que evidenciaronuna expresión reducida o ausente de pEGFRTyr1068 (10/36;27,77%) mostraron activación de la vía de señalizaciónPI3K/Akt/mTOR, a juzgar por la inmunodetección depAktSer473 y pS6Ser235/236. Finalmente, 12/36 (33,33%) de losPC mostraron una expresión reducida de PTEN. Cuando elporcentaje de células positivas cuantificados en los casosde PC se evaluó frente a los controles de epidermis normal,la prueba de Kruskall-Wallis mostró diferencias significativaspara pEGFRTyr1068 (P < 0,01), pAktSer473 (P < 0,01) ypS6Ser235/236 (P < 0,01), pero no para PTEN (P = 0,26). Losresultados demuestran que las moléculas implicadas en lavía de señalización PI3K/Akt/mTOR se desregulan duranteel proceso de carcinogénesis epidérmica en caninos. Eneste contexto, la sobreexpresión de pEGFRTyr1068, pAktSer473y pS6Ser235/236, junto con la disminución de la expresión dePTEN, puede facilitar la progresión de los PC caninosmediante la desregulación de las funciones celulares claveen las que está implicada la vía de señalización PI3K/Akt/mTOR. Estos hallazgos proporcionan información valiosaque señala a esta vía de señalización como un potencialobjetivo terapéutico para el desarrollo de nuevas terapias.