Estudios funcionales y de localización de la proteína VP5 del Virus de la Bursitis Infecciosa en células de ave

CARBALLEDA, J.M.; MARONICHE G.; CHIMENO ZOTH S.; LUCERO, S.; GÓMEZ, E.; BERINSTEIN, A.

Encuentro; XXXII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2013

El virus de la enfermedad de la bursitis infecciosa (IBDV), es responsable de un enfermedad aguda muy contagiosa que afecta pollos de más de 3 semanas y causa importantes pérdidas económicas a la industria avícola en todo el mundo, particularmente porque causa inmunosupresión, lo que deja susceptible al animal a sucesivas enfermedades. Es un virus desnudo, con genoma ARN de doble cadena bisegmentado, perteneciente a la familia Birnaviridae. El virus posee 5 proteínas, VP2 y VP3 conforman la cápside, VP1 es una ARN polimerasa ARN dependiente y VP4, una proteasa autocatalítica. La proteína VP5 de IBDV es no estructural y se desconocía su existencia hasta hace algunos años. La función de VP5 es contradictoria en la bibliografía respecto a su capacidad para inducir o inhibir la apoptosis en células infectadas con el virus. Por otra parte, aunque fue demostrada su acumulación en la membrana plasmática en distintos tipos celulares, no se conoce la topología de la misma y se la ha encontrado también localizada en otros compartimentos subcelulares como las mitocondrias. VP5 posee un dominio hidrofóbico que fue propuesto como putativo dominio transmembrana. En la reunión SAV 2012 mostramos, a través de un ensayo que consiste en la protección a la acción de una proteasa de VP5 fusionada a proteínas fluorescentes, que se trataría de una proteína asociada a la membrana y no de transmembrana como se había propuesto en la bibliografía ya que no expondría al espacio extracelular ni su dominio carboxilo ni el amino terminal. En este trabajo presentamos por una parte la confirmación de estos resultados utilizando proteínas de membrana fusionadas a proteínas fluorescentes que sí exponen dominio al espacio extracelular. De este modo pudimos confirmar que, en células aviares, VP5 se localiza en la membrana plasmática pero no la atraviesa. Por otra parte, un aspecto central del rol de VP5 es también su función en la apoptosis. Algunos trabajos sugieren que se trataría de una proteína antiapoptótica, mientras que otros la apuntan como inductora de este proceso. De todos modos, es probable que VP5 muestre distintas funciones a lo largo del ciclo de infección viral. En ese sentido, estudiamos la expresión génica de distintas proteínas relacionadas a la apoptosis en células infectadas con IBDV o transfectadas con vectores de expresión de VP5. En particular, Caspasa 3 es activada durante la apoptosis y tiene un rol indispensable en este proceso. Utilizando qPCR estudiamos la expresión génica de Caspasa 3 a 24 y 48 horas después de la transfección con vectores de expresión eucariota que portan VP5 en el marco correcto y en células infectadas. Luego de confirmar la expresión de VP5, se observó una fuerte disminución en la expresión génica de Caspasa 3 en las células transfectadas. Este hecho no se observó en células infectadas con IBDV. Los resultados obtenidos contribuyen a esclarecer el rol de una proteína importante para el desarrollo de la infección con IBDV.