INVESTIGADORES
BERINSTEIN Analia
congresos y reuniones científicas
Título:
El elemento IRES como determinante de virulencia en aislamientos de campo del virus de la fiebre aftosa serotipo A
Autor/es:
GARCÍA NUÑEZ, S.; GISMONDI, M.I.; FERNÁNDEZ, N.; KONIG, G.; PÉREZ LLORET, J.; BERINSTEIN A.; MARTÍNEZ-SALAS, E.; CARRILLO E.
Reunión:
Congreso; X Congreso Argentino de Virología; 2011
Resumen:
El Virus de la Fiebre Aftosa (VFA)
es el agente etiológico de la enfermedad del mismo nombre que afecta al ganado
ocasionando importantes pérdidas económicas. Previamente se determinó que los
aislamientos de VFA A/Arg/00 y A/Arg/01 presentan características de virulencia
y patogenicidad diferentes. El
objetivo del trabajo es determinar cuáles son los factores virales involucrados
que determinan las diferencias observadas entre ambos aislamientos y cuál es el mecanismo subyacente responsable de las
mismas. A fin de determinar qué regiones genómicas están
implicadas se construyeron 3 quimeras virales a partir de un plásmido que
contiene el genoma completo de A/Arg/01 intercambiando las regiones
correspondientes de A/Arg/00: Q-FS.00 (se reemplazó el fragmento S), Q-IRES.00
(se reemplazó el motivo IRES) y Q-2CP3.00 (se reemplazó la región que comprende
desde 2C,
inclusive, hasta el extremo 3?).
Las características biológicas de Q-IRES.00 fueron semejantes a las del virus
A/Arg/00, Q-2CP3.00 mostró un comportamiento intermedio entre ambos virus y
finalmente, Q-FS.00 no se diferenció de A/Arg/01. A fin de profundizar sobre la Q-IRES.00 se evaluó
comparativamente la cinética de producción de virus infectivo, de ARN y de
proteínas virales en células infectadas. Las características biológicas de esta
quimera fueron semejantes a las de A/Arg/00, diferenciándose de A/Arg/01. Las
predicciones de la estructura secundaria de ambos IRES sugirieron que las
diferencias se encontraban en el extremo apical del dominio 3. Se determinó la
estructura secundaria de ambos IRES mediante la técnica de SHAPE, observándose
mayor grado de reactividad en el IRES de A/Arg/01 respecto de A/Arg/00. Sin
embargo, no se observaron diferencias significativas en la capacidad de los
IRES para promover la síntesis de proteínas cuando se transfectaron células BHK
con plásmidos bicistrónicos en los cuales el gen Luciferasa (Luc) se encuentra
bajo el control de cada uno de los IRES estudiados; la actividad Luc se evaluó
a las 4, 6 y 20hs post transfección. En conjunto estos experimentos sugieren
que el elemento IRES de A/Arg/00 determina la menor virulencia de A/Arg/00; sin
embargo esta diferencia requeriría de otros elementos que se expresan en el
contexto viral. A fin de determinar si la interacción entre el IRES y el
extremo 3?
no traducible (NT) del ARN viral juega un rol relevante en el proceso se
estudió comparativamente la eficiencia de traducción in vitro a partir de transcriptos virales con o sin el extremo
3?NT, o alternativamente, mediante la transfección de células BHK con plásmidos
bicistrónicos que expresan Luc bajo el control de los elementos IRES en estudio
con o sin el extremo 3?
viral. En este sentido, si bien la presencia del
extremo 3?NT mejoró levemente la traducción de las proteínas virales, no se
observó una correlación directa entre la presencia de los elementos genómicos
homólogos y el nivel de traducción. Los resultados descriptos sugieren
fuertemente que el elemento IRES determina el grado de virulencia de ambos
virus, A/Arg/00 y A/Arg/01, siendo esta la primera descripción del IRES como
determinante de las diferencias en virulencia de dos aislamientos de campo. Sin
embargo, estas diferencias no están relacionadas con la actividad del IRES per se; otros factores virales y/o
celulares en interacción con el IRES deberán considerase a fin de dilucidar el
mecanismo subyacente