OBTENCIÓN DE UN MODELO ANIMAL DE SOBRE-EXPRESION MIOCARDICA DE HSP70

MIRANDA, S.; LORENTI, A.; BIRNEMBAUM, S.; PRADOS, M. B.; ARGIBAY, P.; MARGNI, R.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

SAIC - SAI - SAFE - SAN - SABiología - SABiofísica – SAF

La sobreexpresión de hsp70 en ratones transgénicos ha demostrado proteger el miocardio de injuria isquémica con reducción del área infartada. En trabajos previos demostramos que la IL-6 incrementa la síntesis de hsp70 en cultivos de hibridoma de ratón. Considerando antecedentes del empleo de esta citoquina en pacientes, el objetivo del presente trabajo es establecer un modelo animal de protección miocárdica frente a isquemia experimental por terapia con rIL-6. En primer lugar, analizamos la capacidad inductora de la rIL-6 sobre cultivos de cardiomiocitos aislados. Se emplearon ratas Wistar de 4 a 7 días de vida y se aislaron los miocardiocitos por digestión con colagenasa, cultivándolos (4 x 10(6) células/ml) durante 72 hs en presencia o ausencia de 40 ng/ml de rIL-6. La morfología y capacidad contráctil de los miocardiocitos en ambos casos fue similar y óptima. Las células fueron cosechadas y sonicadas y los lisados celulares fueron analizados por western-blot empleando un mAc.anti HSP70, un sistema amplificador biotinilado y revelado por quimioluminiscencia. Los resultados obtenidos indicaron que la expresión de hsp70 fue notablemente incrementada en presencia de IL-6. La segunda parte del trabajo consistió en ensayar variantes terapéuticas in vivo con el objeto de inducir el aumento de hsp70 en el tejido cardíaco. Empleamos ratones Balb/c de 3 meses de edad (n=32) divididos en 8 lotes, todos inoculados por vía ip: CONTROL (con SF) y lotes A, B y C (con rIL-6): 50 ng (A), 5 ng (B) y 0.5 ng (C). A su vez ensayamos con 1 dosis (Exp. 1) y con 2 dosis iguales separadas 24 hs entre sí (Exp.2). A las 24 hs siguientes se aislaron los miocardiocitos para analizar la expresión de hsp70 y se tomaron muestras de sangre para control de laboratorio. Los resultados obtenidos indicaron los miocardiocitos provenientes de ratones inoculados con dos dosis de 50 ng/ml de IL-6 incrementaron la síntesis de hsp70 en un 100%, sin alterarse los parámetros de laboratorio analizados, sugiriéndose como un modelo terapéutico efectivo.