Un nuevo método de FISH que permite múltiples hibridizaciones en minutos y que preserva la muestra.

MONCALERO VERA; FARINI VERÓNICA L; SIPOWICZ PABLO; ALVAREZ-HEDUÁN FACUNDO; RADRIZZANI MARTIN

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología y XLII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental.; 2010

SAIC - SAFE - SAFIS

La práctica médica requiere de estudios moleculares complejos como la hibridación de sondas fluorescentes ?in situ? o su acrónimo del ingles ?FISH?. Esta técnica es la principal herramienta para estudios citogenéticos requeridos para determinar el análisis en médula de Leucemias, líquido amniótico de embarazos en curso, cardiopatías congénitas y cáncer de mama entre otras. En muchos de estos casos se requiere rapidez y, a veces, confirmaciones con otras sondas. Nuestro objetivo es la obtención de un tratamiento que preserve la muestra de ADN permitiendo aplicar la técnica de FISH varias veces a una misma célula. Para ello los extendidos celulares fueron desnaturalizados en una nueva solución de desnaturalización fría (NaOH en Etanol) y luego son deshidratados para preservar el DNA desnaturalizado. La hibridación se realizó con sondas diluidas en una mezcla de hibridación modificada y desnaturalizadas por calor. Cada preparado se incubó 30 minutos a 45° C, se enjuagó el exceso de sonda y se tiñó con DAPI para observar al microscopio de fluorescencia. En las rondas de hibridación subsiguientes los tiempos de desnaturalización se redujeron a 30 segundos. Esta técnica fue puesta a punto para fijaciones de líquidos amnióticos, médula, sangre periférica y semen. En todos los casos se lograron hibridaciones sucesivas (2 a 5) que pudieron ser analizadas el mismo día, preservando la morfología cromosó- mica a lo largo de todo el proceso. En ningún caso se observaron trazas de hibridaciones anteriores que pudieran dar lugar a confusiones de interpretación. Concluyendo, la desnaturalización del ADN genómico mediante NaOH permite con sondas múltiples de FISH hasta 5 hibridaciones sobre la misma célula en horas. Este nuevo procedimiento facilita y permite el análisis de alteraciones citogenéticas complejas en leucemias y también podría emplearse para el diagnóstico genético preimplantatorio.