Recuperación de anticuerpos específicos de eritrocitos en pacientes infectados por HIV-1

MARIA NOÉ GARCIA; ROMINA BARRAL; MARIA MERCEDES AVILA; ROBERTO DANIEL RABINOVICH

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso Argentino de Virologia; 2005

Sociedad Argentina de Virología

Antecedentes y Objetivos:En la infección por HIV-1 el virus unido a eritrocitos es una parte sustancial de la carga viral en sangre y la única detectable en muchos de los pacientes tratados exitosamente con antiretrovirales, a pesar de ello no existen estudios que permitan entender la cinética de la unión del virus a los eritrocitos. Con el objeto de aportar conocimientos sobre este tema se trato de determinar la presencia de anticuerpos específicos asociados a glóbulos rojos y eventualmente si el patrón de estos era semejante de los anticuerpos presentes en plasma y si tenían alguna relación con la capacidad de adsorción de virus por los eritrocitos. Materiales y Métodos: Eritrocitos provenientes de individuos infectados con HIV-1 y de dadores fueron obtenidos por sedimentación con Dextran 4% y luego lavados 4 veces con RPMI. Una fracción de los eritrocitos fue tratada con buffer Glicina-ClH pH 3,2 para separar los inmunocomplejos y neutralizados con NaOH. El mismo procedimiento se utilizo con el líquido del último lavado utilizado como control. La presencia de anticuerpos específicos se determino utilizando el Western Blot (New Lav Blot, BIO-RAD). Con otra fracción de los eritrocitos fue ensayada la adsorción de virus incubando los mismos con una dilución de un stock viral enriquecido en partículas virales mediante ultracentrifugación (60 pg/ml de Ag p24, equivalente a 1000 DICT50) a 37º C durante 30 minutos. La concentración de antígeno se determino antes y después de la adsorción utilizando el Kit Murex HIV-1 Amtigen Mab. Resultados:Se determino la presencia de inmunoglobulinas específicas para HIV-1 en los eritrocitos de 10 de los 19 pacientes infectados. El patrón de inmunoglobulinas asociada a los eritrocitos difería del presente en los plasmas de los mismos. Estando presente en 9 de estos 10, la banda p24/25 correspondiente a la nucleoproteína viral. La presencia de anticuerpos anti p24 fue detectada en 8 de 10 con carga mayor de 100 copias por mililitro y solo en 1 de los 9 pacientes con carga viral menor que 100. Se observó una adsorcióm del 100 % de virus suministrado en sólo dos pacientes, estos pacientes fueron los únicos de cuyos eritrocitos se recuperaron anticuerpos contra las glicoproteínas de envoltura. Entre los pacientes que no tuvieron anticuerpos detectables contra glicoproteínas asociada a eritrocitos el porcentaje de adsorción vario entre 0 y 50%. En los eritrocitos de 5 dadores no infectados no se registró ninguna banda específica para HIV-1 ni se pudo demostrar adsorción. CONCLUSION: Los resultados presentados son la primera evidencia de la presencia de inmunoglobulina específica asociada a eritrocitos en la infección por HIV. La adsorción eficaz de virus por parte de los eritrocitos que tenían anticuerpos contra la glicoproteína probablemente refleja la presencia de paratópes libres en los inmunocomplejos asociados. Por otra parte la presencia de anticuerpos anti-p24 en la mayoría de los pacientes reflejaría que la mayor parte de los inmunocomplejos circulantes están constituidos con esta proteína. Estudios programados son necesarios para determinar en que medida los distintos patrones de anticuerpo unidos a los eritrocitos corresponden a distintos estados de la infección por el virus.