DISEÑO DE UN SISTEMA PARA LA EXPRESIÓN INDUCIBLE DE PROTEÍNAS EN PLASTIDOS DE NICOTIANA TABACUM INSPIRADO EN EL MECANISMO DE QUORUM SENSING

NOELIA BOCCARDO; MARIA EUGENIA SEGRETIN; FERNANDO BRAVO ALMONACID

Jornada; II Jornadas de doctorandos y estudiantes avanzados de ciencia y tecnología; 2015

La mayoría de los cultivos son afectados por enfermedades que alteran su productividad comprometiendo la seguridad alimentaria. Se han destinado muchos esfuerzos para la obtención de cultivos resistentes a patógenos mediante transgénesis. La transformación del genoma plastídico presenta ventajas frente a la transformación del genoma nuclear, entre ellas: mayor número de copias del transgen, ausencia de efectos de posición y silenciamiento, mayores niveles de expresión, y herencia materna de los cloroplastos en muchas especies de interés. El objetivo de este trabajo es desarrollar un sistema de expresión inducible inspirado en el mecanismo bacteriano de quorum sensing (QS). A partir de un vector de transformación plastídica generado previamente en el laboratorio, se ensamblaron los siguientes elementos del sistema de QS de Pseudomonas aeruginosa: el promotor del gen lasB fue clonado río arriba del gen reportero uidA, y las secuencias codificantes de las proteínas regulatorias LasR y RhlR fueron incluidas solas o combinadas en un policistrón rio abajo de la secuencia promotora psbA. Se obtuvieron líneas transplastómicas de Nicotiana tabacum cv. Petit Havana mediante biobalistica, las cuales están siendo caracterizadas a nivel molecular y evaluadas por expresión de la proteína GUS post-tratamiento con las homoserin lactonas (HSLs) C4-HSL y 3-oxo-C12-HSL, que junto con sus proteínas reguladoras afines (LasR y RhlR, respectivamente) permiten la transcripción desde el promotor LasB.