CLONADO Y CARACTERIZACIÓN DE LA SOLANESIL PIROFOSFATO SINTASA DE Trypanosoma brucei.

LEVINGSTON MAC LEOD, J. M.*, SEGATORI V. I., PIÑERO T. A., REBOZZIO R., GALLI L., ÁLVAREZ I. B., FERELLA M., DOCAMPO R., PRAVIA C., BONTEMPI E. J.

Ciudad Autónoma de Bs. As., UADE

Congreso; Congreso Biolatina de Biotecnología, Universidad Privada UADE. Feb.2006.; 2006

  Dado que algunas Poliprenil Pirofosfato Sintasas de tripanosomátidos fueron recientemente presentadas como nuevos blancos de drogas, hemos secuenciado y caracterizado el gen de la SPPS de Trypanosoma brucei, el agente causante de la enfermedad del sueño. La misma se presenta en 37 países subsaharianos donde se halla una población en riesgo de 60 millones de personas y 50 millones de cabezas de ganado. El gen TbSPPS codifica para una PPPS de cadena larga de 1.080 pb, codificando una proteína de 359 aminoácidos con un peso molecular de 39,25 kDa y un pI de 6,57. El gen se encuentra en simple copia por genoma haploide. La secuencia aminoacídica deducida presenta los cinco dominios esenciales para la actividad y posee un patrón alternante de regiones hidrofóbicas típico de la familia de las PPPS. La proteína recombinante fue expresada en un sistema procariótico con el vector pMAL-p2 en forma soluble. La purificación se realizó mediante columna de amilosa. La actividad de la proteína purificada se midió de forma indirecta, a partir de la generación de pirofosfatos. La proteína recombinante demostró actividad de SPPS. Empleó como sustrato óptimo el GPP. Anticuerpos contra la SPPS de T. cruzi cross-reaccionan con la TbSPPS, y la localizan en organelas de T. brucei, que no son los glicosomas, a diferencia de T. cruzi. Dado que algunas Poliprenil Pirofosfato Sintasas de tripanosomátidos fueron recientemente presentadas como nuevos blancos de drogas, hemos secuenciado y caracterizado el gen de la SPPS de Trypanosoma brucei, el agente causante de la enfermedad del sueño. La misma se presenta en 37 países subsaharianos donde se halla una población en riesgo de 60 millones de personas y 50 millones de cabezas de ganado. El gen TbSPPS codifica para una PPPS de cadena larga de 1.080 pb, codificando una proteína de 359 aminoácidos con un peso molecular de 39,25 kDa y un pI de 6,57. El gen se encuentra en simple copia por genoma haploide. La secuencia aminoacídica deducida presenta los cinco dominios esenciales para la actividad y posee un patrón alternante de regiones hidrofóbicas típico de la familia de las PPPS. La proteína recombinante fue expresada en un sistema procariótico con el vector pMAL-p2 en forma soluble. La purificación se realizó mediante columna de amilosa. La actividad de la proteína purificada se midió de forma indirecta, a partir de la generación de pirofosfatos. La proteína recombinante demostró actividad de SPPS. Empleó como sustrato óptimo el GPP. Anticuerpos contra la SPPS de T. cruzi cross-reaccionan con la TbSPPS, y la localizan en organelas de T. brucei, que no son los glicosomas, a diferencia de T. cruzi.