Caracterización de la familia de proteínas Pumilio en Trypanosoma cruzi y regulación traduccional de proteínas.

CARO, FLORENCIA; BERCOVICH, NATALIA; ATORRASAGASTI, CATALINA; LEVIN, MARIANO J; VAZQUEZ, MARTIN

Rosario, Argentina

Congreso; XX Reunión de Protozoología y Enfermedades Parasitarias (Sociedad Argentina de Protozoología).; 2004

Los genes que codifican para proteínas transcriptos por la ARN polimerasa II no están sujetos a regulacion a nivel de inicio de trascripción en Trypanosoma cruzi. Por consiguiente, lo únicos eventos regulatorios son procesos post-transcripcionales. Las proteínas pumilio son encontradas exclusivamente en eucariotas y en base a los estudios realizados hasta la actualidad se les ha asignado una función en común: el mantenimiento de las células en estado stem, promoviendo su proliferación y reprimiendo su diferenciación. Las proteínas pumilio consisten en un dominio de unión al ARN caracterizado por 8-9 repeticiones imperfectas de 36-40aa y reprimen la traducción de ARNm por unión a sus regiones 3’UTR. Utilizando una combinación de estrategias in silico logramos identificar 9 proteinas pumilio en el genoma de Tcruzi, TcPUF1 a TcPUF9. Las estrategias consistieron en rastraer el genoma usando los perfiles de cadenas ocutas de Markov (HMM) de dominios PUF como datos de entrada en el programa MAST sobre el dataset de secuencias genómicas de Tcruzi de TIGR. Con las proteínas de asi identificadas se construyeron HMMs PUF específicos de Tcruzi y se repitió el procedimiento. Usando la información conocida de otros organismos acerca del sitio de unión de las pumilio a sus ARNm blanco, pudimos predecir que TcPUF1 y2 tendrían la misma especificidad de secuencia que la de Drosophila y humanas, que las TcPUF3, 5, 6 y 9 tendrían afinidad por el trinucleótios UGU al menos y TcPUF4, 7 y 8 son las más divergentes. Actualmente estamos ensayando estas hipótesis usando el sistema de tres híbridos en levadura y construyendo perfiles HMM de los posibles sitios de unión para rastraer el genoma de Tcruzi en busca de los posibles ARNm blancos in vivo de estas proteínas.