COCULTIVO DE CÉLULAS LUTEALES PORCINAS Y COMPLEJOS CUMULUS OVOCITO PORCINOS DURANTE LA MIV: EFECTO SOBRE LAS CÉLULAS DEL CUMULUS

TEPLITZ, G.; LORENZO, MS.; CRUZANS, PR.; MARURI, A.; LOMBARDO, DM.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; VIII Jornadas de Jóvenes Investigadores 2018; 2018

Secretaría de Ciencia y Técnica FVET-UBA

La producción in vitro de embriones porcinos es una biotecnología poco eficiente, con bajos porcentajes en la formación de los pronúcleos y altos porcentajes de polispermia. La utilización de un cocultivo recrearía de una mejor forma el ambiente en el cual se desarrollan estos procesos in vivo, mejorando sus resultados. Existe un estrecho contacto entre las células del cumulus y el ovocito mediante uniones gap, que son bidireccionales permitiendo el intercambio de moléculas entre los mismos. Las células del cumulus se encuentran en gran cantidad en los complejos cumulus ovocitos (COC) post-maduración in vitro (MIV) y son removidas en muchos protocolos de FIV, pudiendo ser utilizadas como un enfoque no invasivo para evaluar la competencia ovocitaria. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del cocultivo de células luteales porcinas y COC porcinos sobre la apoptosis y los niveles de especies reactivas derivadas del oxígeno (ERO) en las células del cumulus. Para la obtención del cultivo de células luteales porcinas (CLP) y de los COC se utilizaron ovarios provenientes de faena. Los COC se obtuvieron por aspiración folicular y luego se maduraron in vitro durante 44 h. La MIV se realizó en gotas de 100 μL utilizando TCM 199 suplementado. Los grupos experimentales fueron el control con gonadotrofinas (C+hMG) y cocultivo con CLP pasaje 1 (CLP-1), sembradas en una concentración de 2 x 104 cél/mL, 24 h previas a la MIV. Los COC post-MIV de ambos grupos se denudaron con hialuronidasa y luego se evaluó la apoptosis en las células del cumulus con Anexina V/ ioduro de propidio (IP) mediante citometría de flujo. Por otro lado, se evaluaron los niveles de ERO mediante la determinación de 2ʼ7ʼ-diacetato de diclorodihidrofluoresceina (DCH-FDA) por citometría de flujo. El porcentaje de células vivas fue significativamente mayor en el C+hMG (p= 0). La necrosis disminuyó significativamente en el sistema de cocultivo (p= 0). Por otro lado, la apoptosis temprana en las células del cumulus fue significativamente menor en el sistema de cocultivo (p= 0), pero de forma contraria, el porcentaje de apoptosis tardía en el cocultivo aumentó significativamente (p= 0). Se observó un porcentaje significativamente mayor de células del cumulus positivas a DCHFDA en el C+hMG (75%; n= 16311) con respecto al cocultivo (26%; n= 14270) (p= 0). Podemos concluir que la apoptosis en las células del cumulus no constituye una forma fiable para predecir el efecto del cocultivo con células luteales sobre los ovocitos. La medición de los niveles de ERO en las células del cumulus podría utilizarse como un enfoque no invasivo para evaluar la competencia ovocitaria.