EFECTO DEL COACTIVADOR CBP SOBRE LA ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL DEL PROMOTOR DEL GEN DE LA 5-AMINOLEVULINATO SINTETASA

CERUTI, J M; VARONE, C L; CÁNEPA E T

Viña del Mar.Chile

Congreso; XXXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular (SAIB); 2000

SAIB

En trabajos anteriores hemos demostrado que el cAMP posee un efecto inductor del gen de ALAS a nivel transcripcional y que es mediado por la activación de la PKA. Por deleciones seriadas de la zona promotora, en experimentos de transfección transiente, se mape{o la zona responsable de dicho efecto a la región entre -156 y -38 pb. Analizando esta zona se identificaron dos sitios con alta homología a CRE ubicados en -152 y -45. Estos sitios tienen actividad funcional en respuesta a cAMP. Por otro lado hemos determinado que la sobrexpresión de CREB posee un efecto inductor o represor de de la transcripción de ALAS dependiendo de su estado de fosforilación. Estos efectos son específicos dado que no se observan al cotransfectar con mutantes CREB de unión al DNA y de fosforilación. Analizamos estructural y funcionalmente los elementos con alta homología a CRE. Mutaciones de los sitios CRE analizados en ensayos de retardo en gel y en experimentos de transfección transiente demostraron ser responsables de la acción inductora ejercida por el cAMP, uniendo específicamente al factor CREB. En el presente trabajo por experimentos de transfección transiente mostramos evidencias de que el coactivador CBP media la respuesta dependiente de cAMP, aumentando la actividad inductora de CREB en presencia de PKA cerca de dos veces. Por otro lado demostramos que revierte el efecto represor de CREB. Estos efectos son dependientes de la actividad de PKA, dado que la cotransfección con una mutante dominante negativa de la kinasa anula la actividad de CBP. Además es importante la ubicación relativa al inicio de la transcripción de los sitios CRE para que se evidencie el efecto de CBP. Los resultados muestran una función inductora de CBP sobre la expresión de ALAS y postulamos que este efecto podría deberse al reclutamiento de factores o a su actividad acetiltransferasa de proteínas.