Bcl2L10 es un blanco transcripcional de STAT3 y su inhibición promueve la muerte celular en melanoma.

PICCO ME; QUEZADA MJ; VILLANUEVA MB; CASTRO MV; BARBERO G; LOPEZ BERGAMI P

Buenos Aires

Jornada; XXXIII Jornadas Multidisciplinarias de Oncología.; 2018

Instituto Angel Roffo

Melanoma es la forma más severa de cáncer de piel y constituye un graveproblema sanitario a nivel nacional y mundial. Elfactor de transcripcion STAT3 cumple un importante rol en el desarrolloy progresión de melanoma al promover la proliferación y sobrevida celular, laevasión inmune y la resistencia a tratamientos. El objetivo del presenteproyecto es caracterizar el rol de la proteína Bcl2L10 en melanoma y laregulación de su transcripción por STAT3. La proteínaBcl2L10 es una de las seis proteínas con función anti-apoptotica de la familiade Bcl-2 y ha sido muy poco estudiada hasta el presente.  Nuestros resultados muestran que Bcl2L10se expresa en líneas celulares de melanoma y que sus niveles son mayores enlíneas celulares con activación constitutiva de STAT3. También observamos que unsubgrupo de muestras derivadas de pacientes con melanomas malignospresentó una elevada expresión de Bcl2L10, en comparación con muestras normales.El silenciamiento de STAT3 mediante shRNA redujo significativamente (p< 0,001) los niveles de Bcl2L10, tanto a nivel de ARNm (determinado por PCRen Tiempo Real) como a nivel proteico (determinado por Western blot). Empleando distintosfragmentos del promotor de Bcl2L10 en ensayos de luciferasa logramos determinarque la secuencias regulatorias responsables de la regulación de Bcl2L10 por STAT3 se encontraban ubicadas en una región ubicadaentre los nucleótidos -1634 y -548 del promotor de Bcl2L10, en concordancia conla presencia en dicha zona de sitios consenso para STAT3.Experimentos de mutagénesis dirigida permitieron determinar que STAT3 regula la transcripción de Bcl2L10 al unirsea los sitios CCCCAGAAATACC y   TCTCAGAAGGAGA ubicadosen la posición -559  y -1306, respectivamente,del promotor de Bcl2L10 humano. La unión de STAT3al promotor de Bcl2L10 fue confirmada mediante ensayos de ChIP (Inmunoprecipitaciónde Cromatina).  Para evaluar elrol de Bcl2L10 en melanoma, se determinó el efecto de un inhibidor de Bcl2L10denominado ML258. ML258 no afectó la viabilidad de células de melanoma al ser utilizadocomo agente único pero presentó un efecto aditivo significativo (p < 0,01) con ABT-737 (un BH3-mimético queinhibe a Bcl-2, Bcl-xL y Bcl-w). En conjunto los resultados muestranque la expresión de Bcl2L10 en melanoma se debe a la acción de STAT3 y que lainhibición de Bcl2L10 podría complementar estrategias terapéuticas basadas enla inhibición de otros miembros de la familia de Bcl2.