RACK1 activa las vías de PI3K/Akt y MAP/ERK y promueve la proliferación y resistencia a tratamientos en melanoma.

VILLANUEVA MB; CASTRO MV; BARBERO G; QUEZADA MJ; LOPEZ BERGAMI P

Buenos Aires

Jornada; XXXIII Jornadas Multidisciplinarias de Oncología.; 2018

Instituto Angel Roffo

El melanoma  es una patología tumoral que se origina de latransformación maligna de los meloncitos. Es el cáncer de piel más agresivo ysu tasa de incidencia  se ha incrementadoen las últimas décadas. RACK1 (Receptor for Activated C Kinase 1) esuna proteína ?scaffold? o ?adaptadora? que interactúa con  vías de señalización implicadas envarios  procesos biológicos, incluyendo  proliferación, supervivencia, migración,  y adhesión,  entre otras. La función de RACK1  en melanoma aún no se ha estudiado enprofundidad.El objetivo del presente trabajo fue estudiarel rol de RACK1 en dos líneas celulares humanas de melanoma, A375 y SK-Mel28.Para llevar a cabo nuestro objetivo generamos líneas celulares que expresan elADN copia de RACK1. En primer lugar determinamos la proliferación de estaslíneas celulares mediante un ensayo de cristal violeta. La sobreexpresión deRACK1 aumentó la proliferación un 44% (p<0.001) y un 49% (p<0.01) en A375 y SK-Mel28, respectivamenterespecto de las células control. Para confirmar este resultado silenciamos la expresiónde RACK1 mediante transducción lentiviral con un ARN de interferencia (shRACK1).En este caso el silenciamiento de RACK1 disminuyó la proliferación un 37% y un35% (p<0.0001) en A375 y SK-Mel28, respectivamente, respecto de las células control.Análisis por Western Blot revelaron que la sobreexpresión de RACK1 aumenta marcadamentelos niveles de  fosforilación de AKT (en T308 y S473), ERK1/2 y PKCα,mientras que su silenciamiento disminuye la fosforilacion de dichas quinasas. Finalmente estudiamos el rol de RACK1 en la resistenciaa tratamientos con inhibidores de las vías de señalización mencionadas. Nuestros resultados demostraron que el silenciamientode RACK1 redujo la viabilidad de las células luego de un tratamiento de 48hscon los inhibidores de PI3K y BRAF, LY294002 y PLX-4032, El IC50 de para eltratamiento con LY294002 fue de 14,1 µM en las células control, y se redujo a 7µM al silenciar RACK1 en células A375. En tanto el IC50 para el tratamiento conPLX-4032 fue de 2.3 µM en las células control y se redujo a 0.4 µM en lascélulas A375-shRACK1.En su conjunto estos resultadosdemuestran que la expresión de RACK1 en melanoma contribuye a una mayorproliferación celular probablemente debido a su efecto positivo sobre laactividad de las vías de señalización PI3K/Akt y MAPK/ERK. En concordancia conesta observación, RACK1 aumenta la resistencia celular a tratamientos coninhibidores de ambas vías.