RACK1 silencing reduces proliferation and sensitizes melanoma cells to PI3K and BRAF inhibitors.

VILLANUEVA MB; CASTRO MV; BARBERO G; QUEZADA MJ; LOPEZ BERGAMI P

Mar del Plata

Congreso; Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2018

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Elmelanoma  es una patología tumoral que seorigina de la transformación maligna de los meloncitos. Es el cáncer de pielmás agresivo y su tasa de incidencia se ha incrementado en las últimas décadas.RACK1 (Receptor for Activated C Kinase 1) es una proteína ?scaffold? o?adaptadora? que interactúa con  vías deseñalización implicadas en varios procesos biológicos, incluyendo  proliferación, supervivencia, migración,  y adhesión,  entre otras. La función de RACK1  en melanoma aún no se ha estudiado enprofundidad.Elobjetivo del presente trabajo fue estudiar el rol de RACK1 en dos líneascelulares humanas de melanoma, A375 y SK-Mel28. Para llevar a cabo nuestroobjetivo generamos líneas celulares que expresan el ADN copia de RACK1.Enprimer lugar determinamos la proliferación de estas líneas celulares medianteun ensayo de cristal violeta. La sobreexpresión de RACK1 aumentó laproliferación un 44%  (p<0.001) y un49% (p<0.01) en A375 y SK-Mel28, respectivamente respecto de las célulascontrol. Para confirmar este resultado silenciamos la expresión de RACK1mediante transducción lentiviral con un ARN de interferencia (shRACK1). En estecaso el silenciamiento de RACK1 disminuyó la proliferación un 37% y un 35% (p<0.0001)en A375 y SK-Mel28, respectivamente, respecto de las células control. Análisispor Western Blot revelaron que la sobreexpresión de RACK1 aumenta marcadamente losniveles de fosforilación de AKT (en T308 y S473), ERK1/2 y PKCα, mientras quesu silenciamiento disminuye la fosforilación de dichas quinasas. Finalmente estudiamosel rol de RACK1 en la resistencia a tratamientos con inhibidores de las vías deseñalización mencionadas. Nuestros resultados demostraron que el silenciamientode RACK1 redujo la viabilidad de las células luego de un tratamiento de 48hscon los inhibidores de PI3K y BRAF, LY294002 y PLX-4032.El IC50 para eltratamiento con LY294002 fue de 14,1 µM en las células control, y se redujo a 7µM al silenciar RACK1 en células A375. En tanto el IC50 para el tratamiento conPLX-4032 fue de 2.3µM en las células control y se redujo a 0.4µM en las célulasA375-shRACK1.En suconjunto estos resultados demuestran que la expresión de RACK1 en melanomacontribuye a una mayor proliferación celular probablemente debido a su efectopositivo sobre la actividad de las vías de señalización PI3K/Akt y MAPK/ERK. Enconcordancia con esta observación, RACK1 aumenta la resistencia celular atratamientos con inhibidores de ambas vías.