Cocultivo de células luteales porcinas y complejos cumulus ovocito porcinos durante la MIV: efecto sobre el endurecimiento de la zona pelúcida post-MIV.

TEPLITZ, G.; LORENZO, MS; CRUZANS, PR.; LOMBARDO, DM.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; IX Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias UBA

La alta incidencia de penetración polispérmica es una de las problemáticas más relevantes en la producción in vitro (PIV) de embriones en la especie porcina. Dentro de las causas reportadas se encuentra la utilización de condiciones inadecuadas de maduración. Uno los mecanismos propuestos para el bloqueo de la polispermia es el aumento en la resistencia de la zona pelúcida (ZP) a la digestión proteolítica (endurecimiento de la ZP), como una consecuencia de la exocitosis de los gránulos corticales luego de la fecundación. Existe evidencia que la ZP de ovocitos de cerdas y vacas recién ovuladas se endurece considerablemente antes de la fecundación. Este endurecimiento de la ZP pre-fecundación podría estar involucrado en el control de la polispermia, y la ausencia de este proceso en ovocitos madurados in vitro podría ser una de las razones de su alta incidencia. Trabajos previos en nuestro laboratorio demostraron que el cocultivo de células luteales porcinas y complejos cumulus ovocito (COC) durante la maduración in vitro (MIV) reduce los porcentajes de penetración polispérmica con respecto al control. Para comprender mejor los mecanismos involucrados, el objetivo de este trabajo fue determinar el efecto del cocultivo de COC porcinos y una monocapa de células luteales sobre el endurecimiento de la ZP luego de la MIV. Luego de la MIV, los ovocitos tanto del grupo cocultivo como del control, se denudaron con hialuronidasa 1 mg/mL, se lavaron con PBS y se introdujeron en gotas de 50 μL de una solución de pronasa 0.4 % (g/v) en PBS. La digestión de la ZP se observó en forma continua bajo microscopio invertido, a un aumento de x200 con una platina térmica a 37ºC. El tiempo de digestión para cada ovocito se registró como el intervalo entre el momento en que se ponen en la solución de pronasa hasta el momento en que la ZP no se visualiza. Los resultados se analizaron con el software GraphPad Prism 5 (ANOVA de una vía) y se consideró significativo un p ≤ 0.05. El tiempo de digestión no mostró diferencias significativas entre los tratamientos. En el control (n= 52) fue de 198,8 ± 17,3 seg y en el cocultivo (n= 53) 180 ± 10,5 seg. El mecanismo implicado en la disminución de la polispermia utilizando el sistema de cocultivo no tendría relación con el pre-endurecimiento de la ZP. El bloqueo de la polispermia se establece luego de modificaciones bioquímicas en la ZP debido a la exocitosis de los gránulos corticales luego de la fecundación. De acuerdo con lo concluido, proponemos evaluar a futuro el endurecimiento de la ZP post-fecundación in vitro/activación partenogénica y evaluación de la reacción cortical.