COMPARACIÓN DE DIFERENTES MEDIOS DE CULTIVO PARA EL DESARROLLO DE EMBRIONES PORCINOS PRODUCIDOS IN VITRO

LORENZO, MS.; TEPLITZ, G.; CRUZANS, PR.; LUCHETTI, CG.; LOMBARDO, DM.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; IX Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias UBA

La producción in vitro de embriones (PIV) es afectada por diversas variables asociadas a las condiciones de cultivo utilizadas. Los embriones porcinos producidos in vitro presentan menores porcentajes de desarrollo que en otras especies y son de baja calidad. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el desarrollo y la calidad de embriones porcinos producidos in vitro en diferentes medios de cultivo. Los ovocitos se obtuvieron por aspiración folicular de ovarios provenientes de faena y se maduraron in vitro durante 44 h en estufa a 39°C, con 5% de CO2 y atmósfera saturada de humedad en medio TCM 199 suplementado, en presencia de AMPc y gonadotrofinas durante las primeras 22 h. Para la fecundación in vitro (FIV) se utilizó semen refrigerado a 17°C de machos de fertilidad probada, que se centrifugó a 490 g durante 5 minutos y resuspendió en medio de FIV (TCM 199 suplementado con lactato de sodio, piruvato de sodio, cafeína y albúmina sérica bovina). La gametas se coincubaron en gotas de 100 μL de medio de FIV, conteniendo 20 ovocitos por gota y 1x106 espermatozoides/mL, durante 4 h en estufa a 39°C, con 5% de CO2, 7% O2 en atmósfera saturada de humedad. Los presuntos cigotos se lavaron en TCM 199 suplementado y se reasignaron aleatoriamente a uno de los siguientes grupos, correspondientes a diferentes medios de desarrollo: SOF (n=187), NCSU 23 (n=101), PZM (n=113). Se cultivaron en gotas de 50 μL del medio correspondiente, cubiertas de aceite mineral, en las condiciones antes descriptas. Al día 4 de cultivo se cambió el medio a SOF + glucosa, NCSU 23 + glucosa y PZM. Se registraron bajo lupa estereoscópica los porcentajes de clivaje al día 2 de desarrollo y de blastocistos al día 7. Para evaluar la calidad embrionaria, los blastocistos se fijaron con paraformaldehído al 4% y se tiñeron con Hoechst 33342 para determinar la cantidad de blastómeras por embrión. El clivaje difirió entre los tratamientos siendo mayor al utilizar el medio PZM (74,3% vs 44,9% con SOF y 29,7% con NCS23; p<0,05), pero no se observaron diferencias significativas en los porcentajes de blastocistos/clivados (3,5% con PZM, 8,3% con SOF y 10% con NCSU 23) y blastocistos/total (2,6% con PZM, 3,7% con SOF y 2,9% con NCSU 23; Test de Fisher). Asimismo, la cantidad promedio de células por embrión no difirió entre los distintos medios de desarrollo utilizados (35 con PZM, 46,3 con SOF y 23,6 con NCSU 23; ANOVA no paramétrico). En conclusión, en nuestro sistema de PIV ambos medios convencionales para la especie porcina (NCSU 23 y PZM) permiten el desarrollo hasta el estadio de blastocisto, obteniendo embriones con la misma cantidad de células. El medio SOF, frecuentemente utilizado para la producción de embriones bovinos, puede utilizarse en la especie porcina obteniendo la misma cantidad y calidad de blastocitos que los medios convencionales para la especie porcina.