La interacción de E. coli O157:H7 con el epitelio intestinal humano estimula la producción de la toxina Shiga tipo II

ADRIANA ALBANESE; ELIZABETH GERHARDT; NATALIA AMIGO; CATALDI ANGEL; ZOTTA ELSA; IBARRA CRISTINA

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad de Investigación Clínica (SAIC), LXII Reunión Anual de la Sociedad de Inmunología.; 2014

Sociedad de Investigación Clínica SAIC

En este trabajo se evaluaron parámetros fisiológicos y morfológicos en colon humano incubado con E. coli O157:H7 cepa 125/99 (stx1-, stx2+) (125/99wt). Los fragmentos de colon se obtuvieron de cirugías realizadas en pacientes con cáncer. La mucosa se separó del resto del tejido, se lavó y montó como un diafragma en una cámara modificada de Ussing. Los compartimientos mucoso y seroso se bañaron con solución Ringer a 37ºC y se burbujeó con 95% O2/5% CO2. El flujo neto absortivo de agua (Jw) y la corriente de cortocircuito (Isc) se registraron simultáneamente mediante un dispositivo experimental puesto a punto en el laboratorio. Cuando ambos parámetros se estabilizaron (Jw = 0,16  0,02 µl/min.cm2, Isc = 27,4  2,9 µA/cm2), el lado mucoso del tejido se incubó con 200 µl de 125/99wt o la correspondiente cepa mutada en el gen stx2 (125/99∆stx2), ambas crecidas hasta fase exponencial. Como control negativo se usó una E. coli comensal no patógena aislada de materia fecal humana. La citotoxicidad se determinó en ensayos de viabilidad de células Vero por incorporación de rojo neutro. La cepa 125/99wt pero no la 125/99∆stx2 produjo una inhibición de Jw y una selectiva destrucción de la superficie colónica luego de 1 h de incubación sin modificar la Isc. Estos efectos no se observaron cuando el tejido se incubó con el sobrenadante de cultivo filtrado (SN) de 125/99wt. La citotoxicidad en células Vero fue 400 veces mayor en la solución Ringer del lado mucoso luego de la exposición del tejido a 125/99wt que al SN 125/99wt. La citotoxicidad corresponde a Stx2 ya que fue neutralizada por pre-incubación (1h a 37 ºC) con un anticuerpo monoclonal anti-Stx2. Los resultados indican que la inhibición de Jw y los daños histológicos son inducidos por Stx2, cuya producción aumenta por la interacción del epitelio intestinal con las bacterias. La identificación de los factores del huésped responsables del aumento de Stx2 puede conducir a nuevas estrategias para controlar las infecciones por E. coli O157:H7.