SELECCIÓN DE FUENTES DE CARBONO Y NITRÓGENO PARA LA INDUCCIÓN DE LA SECRECIÓN DE CELULASAS MEDIANTE FERMENTACIÓN EN SUSTRATO SÓLIDO EN CEPAS DE TRICHODERMA NATIVAS DE MISIONES.

CASTRILLO, M. L.; BARENGO, M.; IRRAZÁBAL, S.; RODRÍGUEZ, M. D.; ZAPATA, P. D.; VILLALBA, L. L.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Micología 2014, XXIII Jornadas Argentinas de Micología, 1ra. Reunión de la Asociación Micológica Carlos Spegazzini; 2014

Asociación Micológica Carlos Spegazzini

Debido a la necesidad de satisfacer requerimientos energéticos a partir de fuentes renovables, se ha incentivado la producción de biocombustibles a partir de biomasa vegetal. La degradación de biomasa lignocelulósica en azúcares monoméricos mediante la acción de enzimas celulolíticas es de gran importancia, ya que esta etapa industrialmente utiliza celulosa purificada de elevado costo, lo cual conduce a la necesidad de utilizar materiales alternativos de bajo costo. Los hongos pertenecientes al género Trichoderma, son considerados uno de los mejores secretores de enzimas celulolíticas. Este complejo enzimático se compone de endoglucanasas (EGs), celobiohidrolasas (CBHs) y β-glucosidasas (BGLs), que actúan sinérgicamente en la hidrolisis de celulosa. Los sustratos lignocelulósicos más utilizados para la producción enzimática incluyen residuos generados por prácticas agrícolas y forestales, que contienen nutrientes e inductores para el crecimiento y expresión de enzimas. Por tanto, inducir el aumento de actividad hidrolítica de los extractos de cultivo, es una manera de bajar el costo de preparados celulolíticos para su empleo en la obtención de biocombustibles. Nuestro objetivo fue seleccionar fuentes de carbono y nitrógeno a través de un análisis de varianza, para inducir una mayor secreción de celulasas mediante fermentación en sustrato sólido, en cepas de Trichoderma nativas de Misiones. Se trabajó con tres cepas aisladas y seleccionadas en el Laboratorio de Biotecnología molecular (POS7, NAN13 y TEYU14). Se evaluó la capacidad de secretar celulasas en fermentación en sustrato sólido, utilizando diferentes materiales lignocelulósicos como fuentes de carbono (bagazo de caña de azúcar, aserrín de pino y cascarilla de arroz), y diferentes fuentes de nitrógeno orgánicas (extracto de levadura, urea, sulfato de amonio y el complejo nitrogenado Mandels), seleccionadas por bibliografía. Se determinó cuantitativamente la actividad enzimática de EGs y CBHs mediante el método del ácido dinitrosalicílico, de BGLs usando el método del p-nitrofenil-β-glucósido, y el efecto sinérgico de las tres enzimas, mediante el método del papel de filtro (FPU). Los resultados obtenidos fueron analizados utilizando el programa GraphPad Prism versión 6.0. En todos los experimentos ensayados se observó que la actividad enzimática celulolítica varió en función de las cepas seleccionadas. Se detectó mayor actividad en la fuente de carbono, cascarilla de arroz, para las cepas NAN13 y TEYU14, y en bagazo de caña de azúcar para la cepa POS7. Respecto a las fuentes de nitrógeno se detectó un mayor incremento en la actividad enzimática en los ensayos que contenían el complejo nitrogenado Mandels, lo cual puede deberse a la diferente relación carbono/nitrógeno que este presentó respecto a las demás fuentes de nitrógeno orgánicas. Estos resultados permiten seleccionar los óptimos medios de cultivo para la máxima secreción de celulasas de hongos nativos de Misiones pertenecientes al género Trichoderma.